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随着胚胎工程技术的推广应用,牛活体采卵及体外受精技术成为解决体外生产胚胎紧缺的有效途径。本研究对牛的活体采卵、卵母细胞体外成熟、体外受精及早期胚胎体外发育作了系统研究,研究结果如下:1从屠宰场获取的卵巢1597对,抽吸法简便、快速,平均每对11.4枚卵母细胞。2活体采卵获得的卵母细胞从数量（4.08枚/头）、形态以及后期的发育情况均显著（p﹤0.05）低于屠宰场卵巢获得的卵子;不同个体采集卵子数量差异显著（p﹤0.05）;活体采卵3天前用FSH100IU处理,可提高采卵数量,差异显著（10枚/头与4.6枚/头）（p﹤0.05）。3用不同温度（4℃, 20～25℃和30～35℃）的生理盐水收集卵巢,结果表明30～35℃保存的成熟率和卵裂率最高,卵巢保存时间以6h内为好,一般不超过10h。用卵母细胞进行保存运输,卵母细胞的耐受性低于卵巢,后期发育有影响,但在长途运输超过10h以上,可以做为一种解决方法。4成熟培养液添加第2天发情牛血清（D2OCS）,成熟率、卵裂率（80.2%、75.3%）,获得与胎牛血清（FBS）相近的成熟率、卵裂率（78.9%、76.0%）差异不显著（p>0.05）。5成熟培养液中添加10%的牛卵泡液（bFF）对牛卵母细胞的体外成熟有促进作用,但高浓度的bFF（20%,30%）则抑制牛卵母细胞的体外成熟。6用分离性控精子进行体外受精比用正常精子卵裂率（16.7%与73.7%）极显著降低（P﹤0.01）,但受精卵的囊胚发育率（34.1%与35.8%）无显著差异（p>0.05）,孵育率（41.7%与66.7%）显著降低（P﹤0.05）。7受精液中添加三种浓度咖啡因（5mmol/L,10mmol/L,15mmol/L）均优于对照组,但差异不显著（p>0.05）,其中咖啡因浓度为10mmol/L,肝素浓度为20IU组合,效果较好。8胚胎培养液中添加无游离脂肪酸的BSA对受精卵体外发育有一定的促进作用,与对照组相比囊胚率（28.2%与26.3%）,囊胚孵育率（71.1%与68.9%）差异不显著（p>0.05）,囊胚在形态及细胞团紧密度上优于对照组,无游离脂肪酸的BSA可提高体外胚胎质量。9用三气（5%CO2+5%O2+90%N2）培养受精卵,可以显著提高囊胚率（34.1%与26.3%）及囊胚孵育率（75.2%与66.7%）（P﹤0.05）,胚胎形态和质量也优于二气（5%CO2+95%空气）培养的囊胚质量。10培养液添加第7天发情牛血清有助于囊胚的发育率,显著优于添加第二天发情牛血清的培养液结果（31.4 %与21.6% ）（p﹤0.05 ）,但与添加胎牛血清的培养液（31.4%与26.6%）差异不显著（p>0.05）,第7天发情牛血清有利于受精卵的体外发育。11活体采卵法获得的卵母细胞的卵裂率、囊胚率（70.5%、18.3%）明显低于从屠宰场卵巢获得卵子的卵裂率、囊胚率（75.1%、34.8%）（p﹤0.05）。研究结果表明,重复对母牛活体采卵生产体外胚胎效果稳定,进一步优化卵母细胞的体外成熟及培养体系,提高囊胚发育率,提高采卵技术水平,使活体采卵-体外受精技术早日在我国推广,应用于生产实践。