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[背景]基因的表观遗传学被认为在肿瘤的发生和发展中起到重要作用。而DNA甲基化模式改变引起的MUC1基因表达的改变,对肿瘤细胞的生物学行为的影响起着重要的作用。本研究致力于对MUC1基因的表达情况,以及其在肺癌细胞发生发展中生物学功能进行探究。[目的]揭示煤烟诱导对支气管上皮细胞转化的影响和MUC1基因表达改变与支气管上皮细胞生物学特性改变的相关性及在肺癌增殖、侵袭中的作用。为深入理解MUC1基因在肺癌中的作用进行初步探索,以期为肺癌新的诊断和治疗方法提供研究基础。[方法]①用1.0umol/L,C1煤烟试剂诱导支气管上皮细胞(Beas-2bCoal细胞),通过RT-PCR检测MUC1的表达情况,采用CCK-8试剂检测诱导细胞的增殖生长情况,用平板细胞克隆形成实验检测细胞的增殖能力和群体依赖性,划痕实验和Transwell检测细胞迁移愈合能力。②设计shRNA,筛选有效shRNA,通过脂质体介导的转染试验,同时设立Blank组(空白对照组)、shNC阴性对照组(无关干扰序列阴性对照组),检测MUC1基因的表达对宣威肺癌细胞的生物学特性的影响:(1)通过观察荧光及RT-PCR筛选转染细胞株。(2)用CCK-8试剂检测MUC1基因沉默后细胞的增殖生长情况。(3)用平板细胞克隆形成实验检测MUC1基因沉默后细胞的增殖能力和群体依赖性。(4)划痕实验和Transwell小室实验检测MUC1基因沉默后细胞的细胞划痕愈合以及迁移侵袭能力。③用5 umol/L的5--Aza-CdR甲基化酶抑制,处理Beas-2b,煤烟诱导Beas-2b和XWLC-05细胞,检测MUCl基因表达对宣威肺癌细胞的生物学特性的影响:(1)通过RT-PCR检测MUC1的表达情况。(2)用CCK-8试剂检测甲基化酶抑制剂处理后细胞的增殖生长情况。(3)用平板细胞克隆形成实验检测MUC1基因去甲基化后细胞的增殖能力和群体依赖性。(4) Transwell小室实验检测MUC1基因去甲基化后细胞的细胞划痕愈合以及迁移侵袭能力。[结果]①CCK-8检测显示Beas-2b Coal细胞的增殖生长能力较正常Beas-2b细胞增强。划痕试验显示Beas-2b Coal细胞划痕愈合能力较正常Beas-2b细胞明显增强。提示煤烟引起支气管上皮细胞发生恶性倾向。②shRNA干扰MUC1基因表达沉默,CCK-8检测显示MUC1基因沉默后,宣威肺癌细胞的增殖能力下降,平板克隆和Transwell小室实验显示细胞克隆形成数目明显减少以及侵袭迁移能力受抑。③5-Aza-CdR处理后,CCK-8检测显示MUC1基因去甲基化表达上调后,宣威肺癌细胞的增殖能力增强,划痕试验和Transwell小室实验显示细胞的迁移愈合能力以及侵袭迁移能力增强。[结论]①煤烟诱导支气管上皮细胞的增殖生长能力和划痕愈合能力明显增强。提示煤烟引起支气管上皮细胞发生恶性倾向。②通过shRNA有效抑制XWLC-05细胞MUC1基因的表达,可明显降低细胞增殖、克隆形成以及划痕愈合和侵袭迁移能力;提示MUC1基因可能在宣威肺癌的侵袭转移中起着重要作用。③细胞株体外实验结果显示,低剂量5-Aza-CdR甲基化酶抑制剂可促进MUC1基因去甲基化表达增高;并对宣威肺癌细胞的增殖、克隆形成以及划痕愈合和侵袭迁移能力有促进作用。