牛IFN-γ与奶牛乳房炎S.aureus FnBPA D区基因的串联及表达

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:pengsuli
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奶牛乳房炎是影响乳品工业经济效益的重要疾病之一,引起奶牛乳房炎的致病菌约有150多种,但金黄色葡萄球菌是引起牛乳房炎的主要病原,由它引起的乳房炎很难治愈,而且已有对抗生素产生耐药性的菌株。因此使用疫苗防治乳房炎就成为首选。γ干扰素(IFN-γ)是由机体的NK细胞和T细胞在病毒等特定诱生剂的诱导下,所分泌的一种具有抗肿瘤、抗病毒和免疫调节功能的细胞因子。IFN-γ一直是现代医学和生物学领域研究的热点。近年来有研究指出动物的IFN-γ在直接作为治疗制剂或作为疫苗使用的佐剂对动物疾病呈现出一定的效果。本实验克隆了牛IFN-γ基因,并运用DNA重组技术将其与奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌纤维素结合蛋白A(FnBPA) D区基因进行串联及原核表达,以期为奶牛金黄色葡萄球菌性乳房炎生物工程疫苗的进一步研究提供实验基础。本实验取得以下成果:1本试验成功克隆牛IFN-γ成熟肽基因片段。测序后与GenBank中M29867序列进行比对发现,核苷酸同源性达99.45%,氨基酸同源性为100%。2运用DNA重组技术将BovIFN-γ基因和FnBPA基因进行串联,成功地构建了含IFN-γ和FnBPA融合基因的原核表达质粒,并将其命名为pET32a-IFN-γ-FnBPA。3将此原核表达质粒转化E.coli BL21(DE3)菌株。用IPTG进行诱导,确定最佳诱导时间,大量表达并纯化出目的蛋白。并对所表达的蛋白进行了免疫学活性检测,结果表明表达的蛋白具有活性。
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