【摘 要】
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本文针对1A6/DRIM转录水平,主要是转录起始水平的调控进行了研究.首先,通过引物延伸试验,我们确定了1A6/DRIM的转录起始点是位于其翻译起始点上游147bp;其次,通过构建一系列
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本文针对1A6/DRIM转录水平,主要是转录起始水平的调控进行了研究.首先,通过引物延伸试验,我们确定了1A6/DRIM的转录起始点是位于其翻译起始点上游147bp;其次,通过构建一系列启动子区报告基因重组体并测定和比较其荧光素酶活性,我们明确了1A6/DRIM基因的核心启动子区位于-47到+42之间,并推测出-47到-247之间的序列中可能包含有对1A6/DRIM转录起激活作用的正性元件,-247到-847之间的序列中可能包含有对1A6/DRIM转录起抑制作用的负性元件;第三,通过生物信息学分析、比较突变/缺失E-box的报告基因重组体与野生型报告基因重组体的荧光素酶活性、以及应用凝胶阻滞试验,我们证实了位于1A6/DRIM核心启动子区、对其转录调控起重要作用的DNA顺式元件——E-box;第四,通过生物信息学分析以及酵母单杂交试验,我们确定出结合于E-box、并对1A6/DRIM转录调控可能起作用的候选因子;第五,通过荧光素酶试验、凝胶阻滞试验及染色体免疫沉淀试验,我们证实了上游刺激因子2(USF2)是1A6/DRIM的转录激活因子;第六,通过荧光素酶试验,我们揭示了Myc/Max对1A6/DRIM的转录可能存在着的调控作用.我们的研究不仅揭示了1A6/DRIM基因转录的基本情况,而且,对它的转录调控机制进行了初步的探索,这为进一步认识1A6/DRIM在癌变过程中的活化提供了有益的线索,并为研究其生物功能打下了良好的基础.
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