B型钠尿肽受体在快速起搏家兔房颤心房组织中的表达

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背景和目的:心房颤动(房颤)是最常见的心律失常之一,临床危害严重,虽然通常认为房颤的发展是由于心房压力增加或心房扩张引起,但没有直接的证据证明它,其确切的发病机理仍不清楚。临床实验结果表明,房颤时血清ANP和BNP浓度增高,且其水平变化与房颤病程有关。钠尿肽与其受体(NPR)结合增加cGMP浓度而发挥生物学效应,已证明心脏中存在B型钠尿肽受体(NPR-B/pGC)-cGMP信号系统,但是NPR-B/pGC在心房颤动心房组织中的变化及其病理生理学效应尚不清楚。因此,本文就NPR-B/pGC在快速起搏家兔房颤心房组织中的表达变化进行了研究。  方法:快速心房起搏模型的建立,实验动物取新西兰大耳白兔,雌雄不限,体重为(2.5±0.5)kg,取16只实验动物分为起搏8 h和对照组(假手术组,仅麻醉和置入电极而不起搏),每组各为8只。给予20%乌拉坦1g/kg经耳缘静脉注射麻醉,取颈部切口,分离出右侧颈外静脉穿刺,置入5 F电极导管,J形电极置于右心房,用于起搏。应用 RM6240生物信号系统,同时记录体表肢体导联心电图,采用连续单刺激模式,起搏频率600次/分,强度3.7V。实验结束后取血以备测定血中ANP浓度,取心房组织部分固定,部分液氮冻存。利用放射免疫分析技术、HE染色、免疫组织化学、Western blot及ELISA法,分别测定血中ANP浓度,心房组织形态学变化,NPR-B蛋白的表达以及膜结合型鸟苷酸环化酶活性。  结果:1.放射免疫技术测定假手术组和起搏8h组家兔血浆中 ANP浓度分别为0.239±0.0350.027和0.386±0.086μg/L,起搏8 h组家兔血浆中ANP浓度明显升高,与假手术组相比较差异均有统计学意义(P<0.01)。2. HE染色结果显示,心房心肌纤维呈长带状,多数有分支,其分支相互连接网状。细胞核呈卵圆形,位于中央,可见明暗相间的横纹,但是假手术组和起搏8h组家兔之间无明显的变化。3.利用免疫组化观察心肌中NPR-B的表达结果显示,假手术组和起搏8h组心肌细胞NPR-B均呈阳性,可观察到散在分布的棕色颗粒,但是 NPR-B的染色无明显的变化。Western blot对NPR-B进行定量结果也显示,假手术组和起搏8h组之间无统计学差异。4.利用ELISA法间接测定膜结合型鸟苷酸环化酶(pGC)活性结果,8h组pGC活性与假手术组相比明显提高。  结论:1.家兔快速起搏心房颤动模型中,血液ANP浓度明显升高。  2.房颤家兔心房肌与假手术组相比,心肌细胞膜上NPR-B的表达无明显的变化,但是其细胞膜上与NPR-B偶联的膜结合型鸟苷酸环化酶的活性明显提高。
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