研究目的:体外实验探索胆管细胞（BECs）表达基质金属蛋白酶7（MMP7）的诱导因素,研究轮状病毒（RRV）协同细菌内毒素（LPS）通过TLR4上调MMP7表达的分子机制。研究方法:MA104细胞进行细胞传代,用以RRV扩增和滴度测定。收集足够数量病毒液冻存。永生化人源肝内胆管上皮细胞（BECs）培养、传代和冻存,达到实验所需细胞数量。第一部分:以不同滴度（MOI=0.1、1、10）RRV感染BECs,在不同时间点（6、12、24、48、72h）应用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测上清液因子MMP7、IL-1、IL-12、IFN-γ水平;免疫荧光细胞实验（IFC）观察RRV对细胞TLR3、TLR4表达的影响;台盼兰拒染法检测各时间点细胞死亡情况;选择RRV最佳滴度及作用时间进行后续实验。第二部分:以不同浓度LPS（0.1、1、5、10ug/ml）处理细胞,在不同时间（6、12、24、48、72h）应用ELISA检测上清液因子MMP7、IL-6、IL-8水平;IFC观察不同浓度LPS对细胞TLR3、TLR4、MMP7表达的影响;台盼兰拒染法检测各时间点细胞死亡情况。第三部分;RRV与LPS协同作用于BECs。选择确认浓度的RRV（实验1）分别与合适浓度的LPS共同作用于BECs,对应浓度LPS和RRV作为对照,未作任何处理作为空白对照。ELISA检测上清液因子MMP7、IL-6、IL-8等水平;IFC检测各组TLR3、TLR4、MMP7表达;台盼兰拒染法检测各组细胞死亡情况;研究结果:第一部分:不同滴度RRV感染细胞后较对照组IL-1、IL-12、IFN-γ分泌显著增多（P<0.05）,而MMP7分泌在两组并无差异;与空白对照相比,RRV感染BECs组TLR3表达明显增加（P<0.05）,同时TLR4表达也明显上调（P<0.01）;细胞死亡情况呈病毒剂量和作用时间递增效应（P<0.05）,当MOI=0.1RRV与BECs作用12h时,细胞因子分泌最显著。第二部分:IFC和ELISA显示0.1ug/ml LPS作用于BECs,较空白对照组无明显差异结果（P>0.05）;而1ug/ml LPS处理BECs后胞质MMP7产生和上清IL-6、IL-8、MMP7分泌明显增加（P<0.05）;5ug/ml或10ug/ml LPS作用12h后细胞死亡显著,1ug/ml LPS作用24h细胞死亡才有差异,而0.1ug/ml LPS处理的细胞在整个观察期始终保持活性。第三部分:MOI=0.1RRV感染BECs后,BECs对0.1ug/ml LPS产生明显反应分泌MMP7（P<0.01）,并呈现剂量依赖效应;当与5ug/ml LPS作用后,细胞死亡明显,MMP7表达水平反而下降（P<0.05）研究结论:1、RRV感染BECs显著上调细胞表面TLR4的表达,但无MMP7产生。2、BECs对低浓度（0.1ug/ml）LPS刺激不产生反应,而对高浓度（≥1ug/ml）LPS刺激后MMP7分泌显著。3、RRV感染BECs后,使其对低浓度LPS产生明显反应,MMP7表达明显上调;MMP7表达水平随LPS浓度递增呈现先上升后下降的趋势。