菲律宾蛤仔味道鲜美，营养丰富，蛋白含量高，氨基酸的种类组成及配比合理，其具有很多的药用价值，如提高免疫力、抗肿瘤、抗动脉粥样硬化、抗菌、抗衰老等。中医认为，蛤肉有滋阴明目、强壮滋补、利尿通淋、软坚散结、化痰之功效。前列腺癌是一种复杂的、由环境、遗传因素和性激素交互作用引起的高发病率和高死亡率疾病，传统的治疗效果为手术、放疗、化疗、激素治疗等，但手术后复发率高，放疗和化疗的毒副作用大，激素治疗易产生依赖。因此，从天然产物中寻找高效、低毒的新型抗肿瘤药物尤其重要。本研究采用酶解技术、超滤、凝胶层析技术和反相高效液相色谱法等多种分离纯化手段，从菲律宾蛤仔肉中制备菲律宾蛤仔寡肽，研究了菲律宾蛤仔寡肽的酶解工艺及体外抗前列腺癌活性，借助细胞生物学和分子生物学手段，研究菲律宾蛤仔寡肽对PC-3、DU-145细胞的增殖抑制及作用机理，并初步探讨含抗癌活性菲律宾蛤仔酶解寡肽的水果味固体饮料研发工艺，为抗癌新药物的研发提供一定的依据。研究内容本研究以新鲜菲律宾蛤仔肉为原材料，采用胰蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶对其进行酶解，通过测定酶解液中的游离ANN含量和腥味值的大小来筛选出最佳酶解蛋白酶并优化酶解条件。然后将酶解液超滤截取分子量3KD以下成分，G-25凝胶层析分离纯化，收集抗癌活性最高峰，再将收集的峰进行进一步分离纯化，并用反相高效液相色谱法进行纯度检测，分离纯化得到的菲律宾蛤仔酶解寡肽进行氨基酸序列分析检测。选用人前列腺癌PC-3、DU-145细胞为研究对象，将上述条件得到的菲律宾蛤仔酶解寡肽配制成不同浓度的药液，采用MTT法检测菲律宾蛤仔酶解寡肽对PC-3、DU-145细胞的增殖影响，AO/EB荧光双染色法检测细胞凋亡情况，流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期。对菲律宾蛤仔寡肽酶解液进行脱腥处理，尝试了红茶水、淡盐水、盐溶液、β-CD包埋、粉末活性炭吸附、安琪高活性干酵母、安琪活性干酵母联合粉末活性炭脱腥方法，测定脱腥液中的ANN含量的损失率和腥味值筛选出脱腥方法并优化脱腥条件。采用新鲜水果果汁进行调配，再复配一些酸味剂、甜味剂、稳定剂等制成含菲律宾蛤仔酶解寡肽的水果味饮料，然后浓缩干燥、高压灭菌后进行理化指标的测定。研究结果1.胰蛋白酶为最佳水解酶，酶解条件是温度50℃，加酶量1200u/g，pH8.0，时间8h，菲律宾蛤仔酶解寡肽N端氨基酸序列：Asp-Trp-Pro-His，分子量为607.6Da。2. MTT法结果表明，不同浓度的菲律宾蛤仔酶解寡肽对PC-3、DU-145细胞均有增殖抑制作用，随着药物浓度和作用时间的延长，抑制率增加（P＜0.05）。3.加入一定浓度的菲律宾蛤仔酶解寡肽作用24h后，细胞生长受到抑制，细胞形态不规则；部分细胞死亡，漂浮于培养液中。4.在荧光显微镜下观察AO/EB双染色，对照组无明显的凋亡细胞，10mg/mL菲律宾蛤仔酶解寡肽组出现早期凋亡细胞，20mg/mL、30mg/mL菲律宾蛤仔酶解寡肽组出现晚期凋亡细胞和坏死细胞，被染成橘红色，可见明显的凋亡小体。5.应用Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测，菲律宾蛤仔酶解寡肽作用PC-3、DU-145细胞后，早期凋亡细胞随药物浓度增加，凋亡率明显高于对照组（P＜0.05）；PI标记流式细胞术检测细胞周期，在细胞周期G0/G1期峰前出现亚二倍体峰，即SubG1期峰（凋亡峰），G0/G1期细胞变化不大，S期减少，G2/M期细胞增多。6.最佳脱腥材料是安琪高活性干酵母联合粉末活性碳，脱腥条件是先添加1.5%的安琪高活性干酵母，在温度为30℃发酵反应1h，离心过滤后再用粉末活性炭脱腥，添加量为1.0%，温度为30℃，时间为30min，pH为4.0进行脱腥，脱腥液中游离ANN含量为2.878mg/g，损失率为7.9%，基本上没有腥味，而且还有一股酵母所特有的香味，脱腥液颜色比较澄清。最佳复配水果汁是新鲜橙汁，颜色为橙色，色泽鲜亮，有着鲜橙特有的香味，口感酸甜，无涩味。干燥后得到的粉末状固体饮料溶解性好，有着鲜橙特有的香味，而且卫生指标达标。