论文部分内容阅读
为解决水产加工富含胶原蛋白的副产物高值化利用的重大难题，显著提高水产加工的附加值，实现水产资源“零浪费、全利用”的绿色环保加工理念，本课题以水产加工副产物鱼皮为原料，重点研发高效制备高品质胶原蛋白肽的工艺，并针对胶原肽的抗氧化和抑制佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞的增殖等生物活性，重点开展其对类风湿性关节炎的抑制作用及其机理研究，全面掌握水产胶原蛋白活性肽的理化和功能性质，进而为开发新型治疗关节炎的医用食品提供科学依据。本课题主要研究内容与结果如下：1具有自由基清除活性的鱿鱼皮胶原蛋白肽酶解工艺优化研究以鱿鱼皮为原料，研究了鱼皮基本组成成分，其中蛋白质含量占干物质的79.40%。以蛋白水解度和羟自由基清除率为指标，采用胰蛋白酶酶解制备秘鲁鱿鱼皮中的胶原蛋白肽效果最佳。通过单因素试验和正交试验优化了鱼皮胶原蛋白肽的制备工艺，结果表明：加酶量5%，酶解时间7h，酶解温度50℃，pH值8.0，酶解效果最好，此条件下，鱿鱼皮胶原蛋白肽水解度为26.1%，羟自由基清除率为83.8%。2胶原蛋白肽对AA大鼠FLS的抑制作用及其机理研究将胰蛋白酶水解鱿鱼皮得到的上清液分别用超滤杯及截留分子量为10KDa、5KDa、3KDa以及1KDa的超滤膜进行超滤，共得到四个组分即SCH1(5-10KDa)、SCH2(3-5KDa)、SCH3(1-3KDa)、SCH4(<1KDa)，其中以分子量最小的SCH4对AA大鼠FLS的抑制效果最强，浓度4mg/mL、作用48h后，对AA大鼠FLS的增殖抑制率达25.9%，并且呈现浓度和时间依赖性。HE染色结果表明，SCH4作用后，AA大鼠FLS中出现细胞空泡和胞核浓缩等典型的细胞凋亡特征；Annexin V-FITC/PI流式细胞术双染色分析结果显示，SCH4作用24h后，AA大鼠FLS出现凋亡情况，并且随着浓度的增加，细胞凋亡率和细胞坏死率均增加。此外，SCH4能增强二氢叶酸还原酶的活性。3胶原蛋白活性肽的理化与功能性质研究研究了对AA大鼠FLS具有强抑制作用的胶原蛋白肽SCH4的理化与功能性质。紫外扫描显示，在220nm和280nm处有较大吸收峰；红外扫描显示，SCH4在3420.13、1637.51、1406.98cm-1存在官能团，分别为N-H键伸缩振动的吸收频率、C=O的伸缩振动吸收、C-N伸缩与N-H弯曲的吸收峰；SCH4在pH2-10具有较好的溶解性；20-50℃具有较低的粘度；具有较好的吸水性和持水性；不同的温度条件下，都具有较高的吸油性；pH对SCH4的起泡性和乳化性影响显著。