膈下逐瘀汤联合环磷酰胺对EAC肝癌小鼠肿瘤间质血管生成影响的实验研究

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目的:通过研究膈下逐瘀汤联合西药常用化疗药物环磷酰胺(CTX)对EAC肝癌小鼠肿瘤间质血管数目、血管生成情况、血管内皮因子(VEGF)和微血管密度(MVD)等方面的影响,来探讨其抗肝癌的作用机制。材料与方法:50只昆明种小鼠,随机化分为空白组、模型组、中药组、西药组和合药组。在无菌条件下,除空白对照组外,其余各组小鼠于左腋窝皮下接种浓度为2×106/ml的EAC肝癌小鼠细胞株悬液0.2m1/只。48h后分别给予生理盐水(空白组)、生理盐水(模型组)、膈下逐瘀汤、CTX、膈下逐瘀汤+CTX处理小鼠,连续给药10d,观察各组小鼠的一般状态,检测自主活动度、体重,光镜下观察肿瘤间质血管数目,电镜下观察肿瘤间质血管生成情况,免疫组化法测定血管内皮生长因子(VEGF)表达及瘤体内微血管密度(MVD)。结果:1.各组小鼠一般状态:模型组,小鼠精神萎靡,饮食量少,毛色晦暗,运动迟缓:西药组,小鼠精神差,食量较模型组有增加,毛色稍暗,运动迟缓;中药组,小鼠精神较差,食量较模型组增加,皮毛较光滑,运动略迟缓;合药组,小鼠精神状态良好,食量较模型组有明显增加,皮毛光滑,运动较灵活,接近正常小鼠的一般状态。2.各组小鼠自主活动度:与模型组相比,中药组、西药组、合药组小鼠在5min内的自主活动次数及站立次数均有增加,但合药组更接近空白组,且与空白组相比,无统计学差异(P>0.05)。3.各组小鼠体重:与空白组相比,其他各组小鼠体重均明显下降,且以模型组下降的最多;与模型组比较,中药组、西药组与合药组小鼠体重均有不同程度的增长,但以合药组小鼠体重增长最多,更接近空白组的小鼠体重。4.各组小鼠肿瘤间质血管数目:光镜下,模型组肿瘤间质.平均每个高倍镜视野下(200×)可见6-12个毛细血管.较中药组、西药组、合药组密集:合药组肿瘤间质,平均每个高倍镜视野(200×)下只有3-5个毛细血管,为新牛毛细血管数量最少的组。5.各组小鼠肿瘤间质血管生成情况:电镜下,模型组肿瘤组织内,新牛毛细血管管壁薄,内皮细胞之间间隙大,基底膜薄且松散,中药组、西药组和合药组肿瘤组织内,新生的毛细血管管壁薄且不连续,内皮细胞间以伪足联系,可见到部分残存的血管碎片,但以合药组的血管结构破坏最为严重。6.各组小鼠VEGF和MVD变化情况:免疫组化显示,中药组、西药组与合药组,VEGF阳性的表达及MVD值均低于模型组,合药组降低最为明显。结论:1.膈下逐瘀汤联合环磷酰胺有改善EAC肝癌小鼠的一般状态、提高其生活质量的作用。2.膈下逐瘀汤联合环磷酰胺有抑制EAC肝癌小鼠肿瘤间质血管生成的作用。3.膈下逐瘀汤联合环磷酰胺有降低EAC肝癌小鼠肿瘤组织中VEGF蛋白表达的作用。4.膈下逐瘀汤联合环磷酰胺有降低EAC肝癌小鼠肿瘤组织MVD值的作用。5.膈下逐瘀汤联合环磷酰胺提高EAC肝癌小鼠的生存质量,抑制肿瘤间质血管生长的作用可能是通过降低VEGF蛋白的表达和减少肿瘤间质中的微血管密度而实现的。
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