马腺疫链球菌的分离鉴定及FN结合蛋白免疫原性的研究

来源 :新疆农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jiangchong122
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本实验通过分离鉴定马腺疫链球菌新疆株并对马腺疫链球菌新疆株的FNE和FNEB基因的克隆及原核表达,获得FNE和FNEB截短基因编码的蛋白,并免疫小鼠分析表达产物的免疫原性。本研究从马腺疫病马的脓汁中分离纯化得到革兰氏阳性球菌,经生化和PCR鉴定出该菌为马腺疫链球菌,其对小鼠具有致病性。采用特异性引物PCR扩增马腺疫链球菌新疆株FNE基因片段和FNEB基因部分片段,克隆至pMD19-T载体。利用分子生物学软件分析测序结果,将FNE和FNEB部分基因亚克隆至原核表达载体pET-30a中,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,以IPTG诱导FNE和FNEB重组蛋白的表达,经SDS-PAGE分析在46kD和58kD处出现明显条带, Westernblot分析显示具有反应原性。纯化表达的融合蛋白免疫小鼠,以马腺疫链球菌新疆分离株攻毒免疫的小鼠后,FNE免疫组小鼠无保护力而FNEB免疫组小鼠的保护率约为60%,表明FNEB蛋白具有较好的免疫保护性。本研究成功的从新疆伊犁地区分离出一株马腺疫链球菌新疆株,成功克隆和表达了马腺疫链球菌的FNE和FNEB截短基因,免疫小鼠获得较好的保护效果,为重组马腺疫链球菌FNE和FNEB蛋白亚单位疫苗的研制奠定基础。
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