2016至2018年间,山东长岛地区深水网箱养殖的许氏平鲉大量爆发疾病,经病原病理学以及人工感染试验验证得知该疾病爆发的主要致病菌为美人鱼发光杆菌美人鱼亚种(Photobacterium damselae subsp.damselae),为深入了解美人鱼发光杆菌美人鱼亚种的致病力差异,本实验从病原库中挑选出25株来源不同的美人鱼发光杆菌菌株,对其表型差异,毒力因子携带以及强、弱毒株与宿主之间互作的转录组学进行分析。(1)美人鱼发光杆菌美人鱼亚种可感染多种海水养殖动物,为研究不同菌株之间的表型差异性,我们对不同来源的25株美人鱼发光杆菌美人鱼亚种菌株特性、溶血特性、生理生化特征、药物敏感性以及5种最敏感抗生素的最小抑菌浓度进行了分析。结果表明:25株菌株在TSB培养基上均为白色不透明圆形菌落,TCBS培养基上菌落显绿色,直径约1-2 mm,革兰氏染色均为阴性;25株菌对3%胰胨水、无盐胰胨水、葡萄糖、肌醇、3%NaCl、ONPG以及精氨酸双水解酶等22种生化反应呈现出高度一致性,对于丙二酸盐、赖氨酸脱羧酶、尿素酶以及西蒙氏枸橼酸盐表现出明显差异;所有菌株中仅有2株菌表现出β溶血,23株菌表现出α溶血;25株菌对丁胺卡那、链霉素、复方新诺明、乙酰螺旋霉素以及苯唑青霉素5种抗生素均表现出耐药性;对萘啶酸、氟罗沙星、菌必治、头孢胺噻肟、盖伯斯林以及洛美沙星6种抗生素均表现敏感性;对恩诺沙星等27种抗生素的药物敏感性存在显著差异;5种抗生素的MIC检测结果表明,25株菌对萘啶酸以及环丙沙星的MIC基本一致,MIC分别为2.5-10μg/ml以及≤2.5μg/ml,对多粘菌素B、氧氟沙星以及洛美沙星3种抗生素MIC差异较大。通过本研究证实不同来源的美人鱼发光杆菌美人鱼亚种菌株表型特征存在明显差异。(2)目前已知感染美人鱼发光杆菌美人鱼亚种后,宿主多伴有出血性败血症等症状,因此目前对美人鱼亚种毒力基因的研究主要针对溶血素相关基因。本实验选取3种溶血素编码基因:hly,dly以及hlyA,一种能编码具有溶血活性磷脂酶的基因plpV以及一种编码胶原酶的毒力基因coⅠP作为研究对象。本研究中除25株美人鱼发光杆菌美人鱼亚种外,通过对PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,结果如下:25株美人鱼发光杆菌美人鱼亚种均携带有hly基因,分别有24株菌携带有hlyA以及plpV基因,有2株菌携带dly基因,有9株菌携带coⅠP基因,携带有毒力基因dly的两株菌其溶血力最强为β溶血。通过人工感染实验对不同菌株的致病力进行差异鉴定,不同菌株之间存在致病力的差异。(3)通过人工感染实验对不同菌株的致病力进行差异鉴定,一株强致病力毒株及一株弱致病力毒株,分别感染健康许氏平鲉,对其进行转录组学分析,结果如下:TRINITY组装得到的总转录本数为236210,得到的总unigene数为199502个,转录本的长度范围主要落在0-500bp之间,大约占63%,共126303条。利用六大数据库GO、NR、KEGG、Pfam、COG以及Swiss-Prot进行unigene注释,分别注释到22960、53358、46197、49800、22280以及61148个unigene。对差异表达基因进行GO以及KEGG富集分析发现,免疫应答以及生物代谢等功能相关基因呈现出了极显著的变化,同时细胞粘附,各种细胞表面受体以及信号转到相关通路均呈现出了极显著的变化。强毒株组中的差异表达基因注释到免疫相关通路数量较多,且注释到的基因数量也较多,弱毒株组差异表达基因中注释到的免疫相关通路较少,且相关基因数量也较少。