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糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy, DR)是指由糖尿病引起的对眼睛血管的损害,它是导致年龄20到65岁的成人出现新型失明的主要原因。DR属于微血管病变,致盲率占眼科双盲中的第1位,DR所致的失明人数是非糖尿病性失明人数的25倍。DR的防治已成刻不容缓的医学命题。复方血栓通胶囊(FXT)是常用的眼科中药制剂,主要由三七、丹参、黄芪、玄参等多味中药组成,具有活血化瘀、扩张血管、增加血流量、改善血液循环和微循环、益气养阴的作用,在临床应用将近二十年。既往大量临床研究表明,FXT对于糖尿病视网膜病变效果良好,可防止DR患者出现的眼底出血、微动脉瘤等症状。为提高复方血栓通胶囊的质量,使其能更加高效、稳定、安全地服务于广大患者,我们对其进行了改造,在原有配方基础上用有效成分制成了复方血栓通新组方(方A和方B)。本研究旨在探究复方血栓通及其新组方对早期糖尿病视网膜病变的影响及作用机制,从而为提升及优化复方血栓通的质量提供坚实的研究基础,为糖尿病视网膜病变的治疗提供新思路。1.复方血栓通干预糖尿病大鼠早期视网膜病变的有效性研究制备糖尿病大鼠模型,考察复方血栓通及新组方对糖尿病大鼠一般体征、血糖、血液流变学、视网膜血管的影响。采用一次大剂量腹腔注射STZ60mg/kg的方法制备糖尿病大鼠模型,给药6个月,FXT包括1050mg/kg和525mg/kg组,方A分为36.6mg/kg和18.3mg/kg组,方B包括39.1mg/kg和19.5mg/kg组.空白组和模型组给予等体积的0.5%CMC-Na。动态考察大鼠的体重、血糖变化,同时测定大鼠的血液流变学参数,视网膜消化铺片法观察视网膜形态学变化,记录大鼠的存活率。结果显示,与空白组相比,糖尿病大鼠存活率为72.9%；体重增长非常缓慢；空腹血糖持续高水平；糖尿病大鼠的全血粘度、血浆粘度、红细胞聚集指数均增加(p<0.05)；同时,视网膜血管基底膜增厚,毛细血管退化,有闭锁现象,静脉扩张明显,周细胞数量明显减少。与模型组相比,FXT1050mg/kg、FXT525mg/kg及方B39.1mg/kg组大鼠存活率略低于模型组,方A36.6mg/kg、方A18.3mg/kg及方B19.5mg/kg组大鼠的存活率略高于模型组；动态观察24周,各给药组大鼠的体重和血糖与模型组相比无明显差异；FXT和方A对糖尿病大鼠血液流变学的影响未呈现剂量依赖性,与模型组相比,FXT1050mg/kg与FXT525mg/kg剂量大鼠的红细胞聚集指数、全血粘度(中切、低切)均明显下降(p<0.05),对全血高切粘度和血浆粘度无明显影响,方A36.6mg/kg和18.3mg/kg大鼠的红细胞聚集指数、全血粘度(中切、低切)、血浆粘度下降明显(p<0.05),对全血高切粘度无影响,方B19.5mg/kg除对全血高切粘度无明显影响外,对其余指标均有明显降低作用(p<0.05),方B39.1mg/kg仅降低红细胞聚集指数,对其他指标没有明显影响。与模型组相比,FXT1050mg/kg、FXT525mg/kg和方A36.6mg/kg组可明显延缓糖尿病大鼠视网膜血管病变,视网膜血管染色较模型组变浅,视网膜静脉扩张不明显,周细胞较模型组增多,无细胞毛细血管数目较模型组减少,其余三组改善视网膜血管病变的趋势较弱。2.复方血栓通延缓糖尿病大鼠早期视网膜病变的作用机制研究探究复方血栓通及新组方对糖尿病大鼠早期视网膜病变的作用机制。模型的制备及分组给药同第一部分。分光光度法测定醛糖还原酶(AR)活性的改变,免疫组化法考察VEGF和PEDF表达的变化,Western blotting法观察occludin和ICAM-1表达量的变化。结果显示,与空白组相比,模型组大鼠视网膜中VEGF表达增加(IOD/area0.66±0.28,空白组0.25±0.03),PEDF表达减少(IOD/area0.07±0.06空白0.19±0.04),与血-视网膜屏障相关的occludin蛋白表达下降70%,炎症因子ICAM-1增加158%,AR活性升高200%。与模型组相比,各给药组大鼠的AR活性、VEGF的表达量均明显降低(p<0.05),FXT1050mg/kg、FXT525mg/kg组,方A36.6mg/kg、方A18.3mg/kg组大鼠PEDF的表达量均明显升高；除方B19.5mg/kg组外,其余各组大鼠视网膜中occludin的表达量均明显升高,ICAM-1的表达量明显下降。综上所述,复方血栓通胶囊及其新组方对STZ诱导的早期糖尿病视网膜病变显示出一定的保护作用,且均是高剂量组优于低剂量组。与复方血栓通胶囊相比,在上述所有指标方面,方A的疗效与FXT相近,方B略次于FXT,但方A及方B低剂量组可略微提高糖尿病大鼠的存活率。三种药物改善糖尿病视网膜病变的作用可能与调节醛糖还原酶活性、VEGF、PEDF、occludin和ICAM-1蛋白的表达有关。