海洋细菌抗真菌活性物质的筛选

来源 :华南热带农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tempman
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采集三批样品,共分离到海洋微生物菌株256株,其中186株细菌,30株放线菌,40株真菌。共筛选了由整个实验室分离的816株菌,有抗真菌活性的菌株为56株,占总数的6.6%,经反复筛选,海洋微生物菌株041381抗真菌活性较强较稳定,对其进行进一步研究。 海洋微生物菌株041381分离自海泥,其最适生长NaCl百分比浓度是6%,能够耐受最高的NaCl百分比浓度为20%。海洋微生物菌株041381利用淀粉培养基(淀粉4%,酵母膏0.5%,陈海水75%),在28℃下静置发酵培养96h产抗真菌活性物质。该活性物质具有良好酸碱稳定性和热稳定性,水溶性较强,醇溶性和酯溶性较差。其抑制作用主要针对白色念珠菌,新性隐球菌等酵母类真菌,而对丝状真菌几乎没有抑制作用;具有广谱抗细菌活性;几乎没有细胞毒性。 菌株041381发酵上清液经70%饱和度硫酸铵沉淀,透析脱盐,SephadexG-75凝胶过滤层柱,得到活性物质B16。以SDS-PAGE胶为基础进行电泳分析,B16的分子量为30-40kD。初步推测该活性物质主要组分为蛋白类抗真菌活性物质。 本研究建立了一种新的廉价的适用于高通量筛选抗酵母类真菌活性物质的方法——美蓝酶标仪法。该法的测定条件如下:96孔板每孔加入待测样品100μL和浓度为10~5CFU/mL的白色念珠菌100μL,作用24h,加入美蓝20μL/孔,使其终浓度为0.05‰,保温10min后在630nm下测定其吸收值,以光吸收值>1视为有活性
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