RP-HPLC法对复方茯苓苷草汤中有效部位(群)的成分检测

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[目的]   在对复方茯苓甘草汤防治常压缺氧性肺动脉高压有效部位(群)的研究取得阶段性成果的基础上,本课题拟将药典[61]推荐并结合实验条件所选择的化学成分作为复方茯苓甘草汤的质量控制指标,通过RP-HPLC技术,优化有效部位(群)的色谱条件,对有效部位(群)检测,建立有效部位(群)的色谱图,同时结合药效学研究,在一定程度上研究该方治疗HPH的物质基础,为研制出安全有效、应用方便又便于质控的治疗HPH的中药制剂打下一定的基础;为中医药的现代化发展在方法学上提供一定的参考。   [方法]   实验分为三个阶段:药液组分分离阶段、单味药的活性成分检测阶段、有效部位(群)活性成分检测阶段:   1.药液组分分离阶段:   用HP20型大孔吸附树脂将复方茯苓甘草汤全方水煎液分离,分别用蒸馏水、30%乙醇、60%乙醇和95%乙醇洗脱,得到相应的四部分,挥尽回收溶剂后获得提取物,转溶,调整体积,罐封冷藏。   2.单味药的活性成分检测阶段:   2.1摸索并优化复方中桃仁、桂枝、知母三味药的主要活性成分的色谱条件   2.2将确定的检测条件应用于全方水煎液进行定性定量分析;   3.有效部位(群)活性成分检测阶段:   将上述检测条件应用于60%洗脱液、95%洗脱液中进行检测,并同时对30%洗脱液、蒸馏水洗脱液进行检测,作定性定量分析,对比参考。   [结果]   1.确定三种活性成分的色谱条件如下:   1.1桃仁(苦杏仁苷)的色谱条件:色谱柱:Hypersil ODS2-C18(250mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇-0.5%冰醋酸(25:75,v/v),检测波长:245nm;流速:1ml/min;柱温:35℃;进样量:20μL。   1.2桂枝(桂皮醛)的色谱条件:色谱柱:Hypersil ODS2-C18(250mm×4.6mm,5μm);流动相:水-甲醇(55:45,v/v),检测波长:285nm;流速:1ml/min;柱温:30℃:进样量:20μL。   1.3知母(芒果苷)的色谱条件:色谱柱:Hypersil ODS2-C18(250mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醛-1%冰醋酸(20:80,v/v),检测波长:320nm;流速:1ml/min;柱温:30℃;进样量:20μL。   2.建立了上述三种活性成分在复方茯苓甘草汤中的色谱图;   3.复方茯苓甘草汤中苦杏仁苷的含量为0.1967mg.g-1   4.复方茯苓甘草汤中桂皮醛苷的含量为20.21μg.g-1   5.复方茯苓甘草汤中芒果苷的含量为0.236mg.g-1   6.将上述的色谱条件应用于四种浓度的溶液进行检测:   6.1仅在30%液中检测到苦杏仁苷,含量为0.18mg.g-1其余溶液中均未发现;   6.2在四种溶液中均未发现桂皮醛;   6.3在95%液,蒸馏水洗脱液中未发现芒果苷,在60%液、30%液中发现芒果苷;但因为不在线性范围内,无法计算含量。   [结语]   (1)RP-HPLC法可以为复方茯苓甘草汤的质量控制提供一定的依据。   (2)三个成分在复方茯苓甘草汤中的色谱图可以作为复方茯苓甘草汤的质量标准图。   (3)本实验探索了中药复方的物质基础,研究表明通过RP-HPLC法检测中药复方的物质基础是有意义的。   (4)上述三点也为复方茯苓甘草汤的指纹图谱奠定基础,为研制出安全有效、应用方便又便于质控的治疗HPH的中药制剂提供有力的依据,这也是本课题今后继续探讨的广阔空间。。
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