宫颈癌线粒体DNA微卫星不稳定性研究

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前言宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤,其发病率与死亡率居世界女性恶性肿瘤的第二位。与其他恶性肿瘤一样,宫颈癌是细胞内遗传物质受环境因素不断作用积累的过程,是一种基因组疾病,主要特征是基因组不稳定。微卫星不稳定(microsatelltie instability,MSI)是基因组不稳定的一个标志,是指由于DNA复制错误引起的简单重复序列的改变,表现为肿瘤组织与其相应的非肿瘤组织DNA结构性等位基因的大小发生改变,包括核DNA微卫星不稳定(nuclear DNAmicrosatellite instability,nMSI)和线粒体DNA微卫星不稳定(mitochondrial DNAmicrosatelltie instability,mtMSI)。近年研究发现,mtMSI在肿瘤的发生发展中起重要作用。本研究采用PCR-SSCP方法检测宫颈癌中线粒体DNA微卫星不稳定发生情况,探讨mtMSI与宫颈癌患者临床病理特征关系,进一步阐明宫颈癌的发病机制,为宫颈癌临床诊断、治疗等提供新的思路。材料与方法一、标本来源收集35例中国医科大学盛京医院2007年8月~2008年1月手术切除的新鲜宫颈癌组织及癌旁正常组织(均经病理学证实),置-80℃冰箱冻存备用。患者年龄30~70岁,平均年龄45.2岁,术前未接受放、化疗、激素治疗史。按FIGO 2000年修订的标准进行临床分期,Ⅰa期6例,Ⅰb~Ⅱa期29例;高分化9例,低中分化26例;淋巴结转移9例,无淋巴结转移26例。二、实验方法采用酚/氯仿/异戊醇提取基因组DNA,PCR-SSCP和变性聚丙烯凝胶电泳及银染方法检测线粒体DNA微卫星不稳定。三、结果观察聚丙烯酰胺凝胶染色结果在凝胶成像仪下观察并记录,若肿瘤组织的条带与其正常组织相比出现等位基因条带的增多或移位等则记为MSI阳性。四、统计学分析采用SPSS16.0统计分析软件进行数据处理,Fisher’s精确概率检验分析,P<0.05为有统计学意义。结果35例宫颈癌检测mtMSI 10例,mtMSI与宫颈癌患者临床分期、病理学分级、淋巴结转移无关(P>0.05),而与患者年龄有关(P<0.05)。mtMSI主要发生于D-loop区,显著高于编码区(P<0.05)。结论1、mtMSI存在于宫颈癌中,可能参与了宫颈癌的发生,D-loop区是宫颈癌mtMSI的重要靶位,D-loop区碱基序列的特征性突变可能与细胞癌变或肿瘤细胞易感性有关。2、mtMSI与宫颈癌患者临床分期、病理学分级、淋巴结转移无关,mtMSI可能是宫颈癌发生的早期现象。
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