论文部分内容阅读
目的：研究A549（肺腺癌细胞系）、HTB-182（肺鳞癌细胞系）的PRDM2、PRDM5、PRDM16基因甲基化状态及其对基因表达水平的影响。方法：体外培养A549（肺腺癌细胞系）、HTB-182（肺鳞癌细胞系），并以HBE(正常支气管细胞系)作为对照细胞系，用MSP检测PRDM2、PRDM5、PRDM16基因的甲基化状态，利用RT-PCR检测PRDM2、PRDM5、PRDM16基因的mRNA表达水平，利用Western-blot检测PRDM2、PRDM5、PRDM16基因的蛋白表达水平，用不同浓度梯度的去甲基化药物（5-aza-2dc）对各肺癌细胞系进行去甲基化处理，观察处理前后细胞的生长曲线变化并检测PRDM2、PRDM5、PRDM16基因甲基化状态的变化及mRNA和蛋白质表达水平的变化。结果：1．A549（肺腺癌细胞系）中PRDM2、PRDM5、PRDM16基因存在高甲基化，HTB-182（肺鳞癌细胞系）中PRDM2、PRDM5、PRDM16基因存在高甲基化，HBE(正常支气管上皮细胞系)中PRDM2、PRDM5、PRDM16基因存在低甲基化。2．经过不同浓度的去甲基化药物（5-aza-2dc）处理后，A549（肺腺癌细胞系）中PRDM2、PRDM5、PRDM16基因甲基化程度逐渐依次减弱， HTB-182(肺鳞癌细胞系)中PRDM2、PRDM5、PRDM16基因甲基化程度逐渐依次减弱，HBE(正常支气管上皮细胞系)中PRDM2、PRDM5、PRDM16基因甲基化程度无明显变化。A549（肺腺癌细胞系）、HTB-182（肺鳞癌细胞系）中随着去甲基化药物浓度的增加，PRDM2、PRDM5、PRDM16基因的甲基化程度逐渐减弱，mRNA及蛋白表达水平逐渐上升，而在HBE(正常支气管上皮细胞系)中随着去甲基化药物浓度的增加，mRNA及蛋白表达水平无明显变化。3.MTT结果显示，经过不同浓度的去甲基化药物（5-aza-2dc）处理后，A549（肺腺癌细胞系）、HTB-182（肺鳞癌细胞系）增殖抑制与去甲基化药物（5-aza-2dc）的浓度呈正相关，5-aza-2dc对HBE(正常支气管上皮细胞系)的增殖抑制没有表现出明显的效应。结论：A549（肺腺癌细胞系）、HTB-182（肺鳞癌细胞系）中PRDM2、PRDM5、PRDM16基因都存在甲基化，而且基因的甲基化导致了PRDM2、PRDM5、PRDM16基因的mRNA及蛋白表达水平的下降，去甲基化药物（5-aza-2dc）能够逆转PRDM2、PRDM5、PRDM16基因的甲基化状态并能恢复PRDM2、PRDM5、PRDM16基因的mRNA及蛋白表达水平。