青霉菌侵染哈密瓜前后超氧化物歧化酶(SOD)的克隆及表达

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哈密瓜是新疆的一种特色果蔬,在采摘后储藏过程中容易腐烂变质,所以对其储藏保鲜方面的研究一直是研究的热点。超氧化物歧化酶(SOD)是一种可以清除自由基的广泛存在的酶。目前研究发现与植物的保藏性,抗病性等密切相关。通过对哈密瓜SOD进行研究为哈密瓜的贮藏保鲜提供新的思路和方向,具有重大的意义。本研究主要是对新疆哈密瓜晚熟品种伽师瓜进行研究,通过对其SOD酶的部分片段进行克隆以及生物信息学分析,对哈密瓜致病青霉菌侵染前后的SOD酶活性变化以及SOD酶的表达量变化做比较研究,得出SOD表达量与活性之间的关系,为后续SOD活性调控位点,以及SOD的抗病机制的研究做铺垫。(1)哈密瓜Cu/Zn-SOD基因部分序列的克隆及分析采用PCR技术,克隆出Cu/Zn-SOD基因cDNA部分序列,命名为HmCu/ZnSOD,提交Genebank,获得登录号为KF671956。HmCu/ZnSOD cDNA序列长403bp,编码133个氨基酸,氨基酸序列分子量为13649.0kDa,等电点PI值是5.24;进化树分析显示哈密瓜的Cu/Zn-SOD与同属葫芦科的黄瓜和西瓜属同一进化分支;氨基酸序列同源性比较得出与其他植物的Cu/Zn-SOD基因高度同源,该基因的亚细胞定位点是细胞质,没有跨膜区域,为细胞内亲水性非分泌蛋白。(2)采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR,RT-PCR)方法对接菌不同时间哈密瓜Cu/Zn-SOD基因转录水平进行研究在同一哈密瓜接菌部分,其在24小时和72小时的表达量会提高,其中在24小时达到最高;不接菌部分,其表达量在24小时增长,在48小时、72小时又下降在96小时又增长,其变化趋势滞后于接菌;在正常未接菌的哈密瓜上,SOD随着时间的延长基因表达变化幅度在各个时间点都普遍低于哈密瓜接菌,且总体趋势缓慢增长。(3)对接菌哈密瓜与不接菌哈密瓜在储藏过程中的SOD酶变化进行测定采用NBT光还原法对哈密瓜SOD接菌与不接菌时不同时间点的酶活性进行测定。结果表明在不同处理下SOD随时间增长变化不同。哈密瓜接菌后SOD酶活性在24小时和72小时有增长,随后随着时间的延长,活性有下降趋势。不接菌哈密瓜SOD变化不明显,其中在同一时期接菌瓜的SOD活性增加幅度高于不接菌瓜。
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