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目的:宫颈癌是一种妇女常见的癌症,也是导致癌症相关死亡的第四大原因,严重威胁着女性的健康。i Rhoms属于Rhomboid蛋白酶家族的非催化活性的蛋白。i Rhoms已经被证实为多种肿瘤的致癌因子,但目前尚不清楚i Rhoms是否与宫颈癌(CC)相关及其作用机制。该研究的目的是阐明i Rhoms的表达与宫颈癌的临床病理分型和预后之间的关系,观察i Rhoms对宫颈癌Hela细胞增殖,细胞周期分布,细胞凋亡的影响,并且探讨其相关Wnt通路在宫颈癌中的作用机制。方法:1.收集20例新鲜宫颈癌组织标本和成对的相邻非癌性宫颈组织标本,Western blot检测i Rhoms的表达,对比其在正常宫颈及宫颈癌中的表达差异。收集宫颈癌患者Ia2-IIa2期的手术病例83例,免疫组织化学方法检测其中i Rhoms蛋白的表达与临床病理类型的关系,通过Kaplan-Meier和Cox回归分析i Rhom1、i Rhom2和Ki-67与宫颈癌患者存活率之间的关系。2.培养宫颈癌Hela细胞系,转染i Rhoms sh RNA基因编码的慢病毒,敲低i Rhoms表达,通过MTT实验、克隆形成实验、流式细胞凋亡实验及细胞周期实验在细胞水平进行功能实验。3.将敲除i Rhom2的宫颈癌Hela细胞及阴性对照组通过基因组微阵列检测,并利用Ingenuity Pathway Analysis(IPA)系统(Ingenuity Systems,Mountain View,CA,USA)进行数据分析,筛选出i Rhoms在宫颈癌中的可能通路及相关基因,用Western blot检测相关蛋白的表达情况进行功能验证。结果:1.与邻近的正常组织相比,i Rhom1、i Rhom2在宫颈癌组织中的表达水平更高i Rhom1和i Rhom2和Ki67的强表达与分期,肿瘤大小和宫旁浸润显著相关。i Rhom1,i Rhom2和Ki67的过度表达与不良预后显著相关。多变量分析表明,FIGO分期和i Rhom2表达是宫颈癌的独立预后指标。2.体外细胞功能实验验证,转染i Rhoms sh RNA基因编码的慢病毒,敲低Hela细胞i Rhoms表达水平,可以抑制细胞增殖、促进细胞凋亡,干扰细胞周期。3.基因组微阵列检测及IPA数据分析显示,i Rhom2的敲除改变了许多肿瘤相关信号传导途径和癌基因,筛选出Wnt/β-catenin通路,通过Western blot检测结果显示i Rhom1敲低显著抑制了Hela细胞中β-catenin,Myc,TGFBR2的表达,并增加了FAS的表达。i Rhom2敲低显著抑制Hela细胞中β-catenin,GSK3β和Myc的表达,这与基因组微阵列数据一致。结论:i Rhoms在宫颈癌中表达升高,且表达与临床特征和预后相关,i Rhom1和i Rhom2高表达患者的无进展生存期及总生存期较低表达者短。敲低i Rhom1和i Rhom2可促进宫颈癌细胞凋亡,抑制细胞增殖,干扰细胞周期,并验证了参与此过程的多个基因和与癌症相关的通路。本研究结果表明,i Rhoms作为一个致癌基因,可能是一个潜在的与诊断和预后相关的肿瘤标志物,可能成为宫颈癌新治疗靶点。