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黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)是十分常见的致病毒素,能通过多种毒性机制引起人全身多个系统器官尤其是肝脏细胞的变性、坏死及增生,并具有极强的致畸、致突变和致癌作用。在预防和干预AFB1毒性及致癌作用的药物筛选和研究中,植物化学物(phytochemicals)逐渐受到人们的关注。研究发现多酚类化合物茶多酚(Tea Polyphenols, TP)在抗突变、抗肿瘤、抗炎、抗病毒、心脑血管保护等方面具有良好的药理学效应,能有效对抗多种因素对肝细胞的损伤作用,并具有良好的抗癌效用。本研究拟通过体外细胞培养实验平台,探讨TP对AFB1引起的人胚肝细胞损伤的干预作用,并尝试通过小剂量AFB1长效暴露诱发肝细胞癌变,观察TP对肝癌发生发展的4个密切相关基因表达的影响作用。第一部份茶多酚对体外培养L-02细胞生存率及DNA损伤的影响目的探讨不同浓度TP对体外培养人胚肝细胞(L-02细胞)生存率及DNA损伤的影响。方法体外培养L-02细胞,采用50、100、250、500、1000mg/L浓度的TP分别干预12、24、36、48h,倒置显微镜观察各组细胞形态学的变化,用MTT法测定细胞的存活率、单细胞凝胶电泳试验(SCGE)观察细胞DNA损伤情况。结果与对照组比较,250mg/L及以上浓度TP干预12h后细胞形态即发生变化,初期表现为细胞皱缩、体积变小,而后细胞皱缩变为圆形,出现大量漂浮细胞及细胞碎片,形态学变化的程度与TP浓度及作用时间有关。100mg/L TP作用48h和50mg/L TP作用的各组细胞的存活率均高于对照组(P<0.05);250mg/L及以上浓度TP干预的各组细胞存活率,除250mg/L作用36h组外,其余各组均低于对照组(P<0.05,1000mg/L组P<0.01),且250mg/L及以上浓度TP干预的不同时间组之间存在时间-剂量反应关系,随着作用时间的延长和TP浓度的增加,L-02细胞存活率减少(P<0.01)。SCGE试验结果显示:与对照组比较,TP作用L-02细胞48h后,TP250mg/L及以上浓度组细胞彗星尾部DNA百分率、Olive尾距增高,差异有统计学意义(P<0.01),并且呈剂量-效应关系,随着TP浓度的增加,L-02细胞的DNA损伤增大。结论低剂量(≤100mg/L)的TP可能具有促进肝细胞生长、保护肝细胞的作用,较大剂量(≥250mg/L)的TP则有细胞毒性和抑制细胞生长的作用。第二部份茶多酚干预对AFB1致L-02细胞损伤的影响目的探讨茶多酚对AFB1致人胚肝细胞损伤的干预作用。方法以人胚肝细胞(L-02细胞)为靶细胞,采用完全随机设计的体外培养实验,对L-02细胞进行常规培养,选取培养至第2d并生长良好的细胞进行试验。分别设立:(1)空白对照组:不加溶剂和毒素,只加培养液分别培养24h和48h;(2)溶剂对照组:①2%DMSO作用细胞24h;②2%DMSO作用细胞24h后,培养液培养24h;(3)AFB,损伤模型组:20、40、80、160mg/L AFB1作用24h;(4)AFB1染毒组:设40、80mg/L两个剂量AFB1作用细胞24h后,培养液培养24h;(5)茶多酚干预组:细胞分别暴露于含40、80mg/L的AFBl培养液24h后,分别给予含TP50、100mg/L的培养液作用24h。用倒置相差显微镜观察L-02细胞的形态,MTT法测定其存活率及SCGE法检测肝细胞的DNA损伤情况。结果(1)与空白对照组相比,AFB1各损伤模型组均引起细胞形态明显变化,存活率呈剂量-反应性下降,其中不同染毒剂量之间差异有统计学意义(P<0.05);(2)与AFB1染毒组相比,50、100mg/LTP干预组细胞形态无明显变化,但生存率高于AFBl染毒组;(3)与对照组相比,AFB1、40、80、160mg/L剂量染毒组彗星头部荧光强度较低,尾部DNA百分率、Olive尾距均较高(P<0.05);(4)与AFB1染毒组相比,50、100mg/L TP干预组彗星头部荧光强度相似,但其尾部DNA百分率、Olive尾距均降低(P<0.05)。结论AFB1染毒导致L-02细胞存活率呈剂量-反应性下降,并