禽流感（Avian Influenza,AI）是由A型流感病毒引起禽类的一种急性,烈性传染病,它的流行与暴发给养禽业造成了巨大的经济损失。寻找安全有效的AIV疫苗是众多学者研究的热点,近年来随着基因工程的研究进展,基因工程疫苗已经成为防治该病的主要手段。本研究根据GenBank已经发表的H₅N₁亚型禽流感病毒（Aivan influenza virus,AIV）具有免疫原性的血凝素（haemagglutini,HA）基因和神经氨酸酶（neuraminidase,NA）基因序列,设计合成引物,利用RT-PCR方法扩增出了HA和NA基因,将其克隆于表达质粒T_md-CMV-IRES-EGFP中,从而得到新的质粒T_md-CMV-HA-IRES-NA-EGFP,使HA和NA基因位于含细胞巨化病毒（CMV）早期启动子的调控下,并与增强型绿色荧光蛋白基因（EGFP）串联。从感染火鸡疱疹病毒（Turkey herpesvirus,HVT）的次代鸡胚成纤维细胞（CEF）中提取病毒总基因组,选择病毒的非必须区US₁₀区为外源片段的插入区域,根据GenBank已经发表的US₁₀区基因序列,分别设计同源臂两侧的引物,以HVT的总基因组为模板用PCR的方法获得US₁₀¹和US₁₀²片断。按照PMD18-T载体的说明将US₁₀¹和US₁₀²分别克隆到PMD18-T载体中,从而得到新的质粒PMD18-T-US₁₀¹和PMD18-T-US₁₀².将质粒PMD18-T-US₁₀¹和PMD18-T-US₁₀²分别用限制性内切酶BamHI和EcoRI酶切,将US₁₀¹克隆于PMD18-T-US₁₀²中,从而得到新的质粒命名为pUS₁₀.将上述质粒T_md-CMV-HA-IRES-NA-EGFP和pUS₁₀用限制性内切酶StuⅠ和BssHⅡ酶切,将串联基因CMV-HA-IRES-NA-EGFP插入到HVT基因的非必需区(US₁₀)中,从而构建了带标记的重组转移质粒并命名为pUS₁₀-CMV-HA-IRES-NA-EGFP.将该转移载体质粒与感染HVT的鸡胚成纤维细胞（CEF）中提取的全细胞DNA,利用脂质体转染的方法共同转染次代CEF,待病毒蚀斑出现后,铺营养琼脂进行培养,利用挑斑和有限稀释的方法筛选带有绿色荧光的病毒蚀斑,进行数轮蚀斑纯化,经荧光和PCR初步鉴定获得了重组火鸡疱疹病毒。本实验运用回收,转化,质粒提取等多种分子生物学实验技术获得了表达禽流感HA和NA基因的重组火鸡疱疹病毒,为今后禽流感基因工程苗的研究奠定了坚实的基础。