目的紫杉醇是卵巢癌的一线化疗药物,主要通过CYP2C8和CYP3A4代谢,但多药耐药影响了其有效性。据相关文献报道,漆黄素与紫杉醇具有协同抗肿瘤作用,并且可以抑制CYP2C8和CYP3A4的活性。我们前期研究发现,消癌平注射液同样可以抑制CYP2C8和CYP3A4的活性。本课题通过分析紫杉醇在大鼠体内、体外的代谢产物,比较大鼠和人的种属差异性。并建立液相色谱-质谱联用（Liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS）法测定大鼠血浆中紫杉醇的浓度,考察在大鼠体内消癌平注射液和漆黄素对紫杉醇药代动力学的影响,以期达到与紫杉醇协同增效的作用。方法1.紫杉醇在大鼠体内、体外代谢产物分析 应用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用（chromatography-quadrupole time-of-flight mass spectrometry,UPLC-QTOF-MS）技术,对紫杉醇给药后大鼠的血浆样品、大鼠肝微粒体孵育后样品和重组大鼠CYP3A2酶孵育后样品进行分析。通过分析各成分的保留时间、一级、二级质谱信息和特征性碎片离子,以及紫杉醇一级质谱的电离规律和二级质谱的裂解规律,对代谢产物进行解析。对比紫杉醇经大鼠代谢后产物与经人代谢后产物的异同点,考察使用大鼠用于药代动力学研究的合理性。2.紫杉醇LC-MS/MS测定方法的建立 使用多西紫杉醇为内标,Poroshell 120 EC-C18色谱柱进行色谱分离。采用0.1%甲酸-乙腈和0.1%甲酸-水作为流动相,比例为75:25,电喷雾电离（electrospray ionization,ESI）,正离子模式。并对生物分析方法的选择性、标准曲线、准确度和精密度、绝对回收率、稳定性和基质效应进行验证。3.消癌平注射液和漆黄素对大鼠体内紫杉醇药代动力学的影响 采用液相色谱-质谱联用（LC-MS/MS）技术,分别考察消癌平注射液和漆黄素对大鼠体内紫杉醇药代动力学的影响。消癌平注射液对紫杉醇药代动力学影响研究分为对照组、消癌平注射液低剂量组（10 m L/kg）、消癌平注射液高剂量组（20m L/kg）,大鼠连续给药7天。漆黄素对紫杉醇药代动力学影响研究分为对照组、漆黄素低剂量组（20 mg/kg）、漆黄素高剂量组（50 mg/kg）,大鼠连续给药14天。两部分研究均单次尾静脉注射紫杉醇6 mg/kg。结果1.紫杉醇在大鼠体内、体外代谢产物分析 经过对大鼠体内、体外代谢后样品分析,总共鉴定了4个紫杉醇的代谢产物,分别是3’-p-羟基紫杉醇、2-羟基紫杉醇、6α-2-二羟基紫杉醇和6α-5’’-二羟基紫杉醇。血浆样品中鉴定出了4个代谢产物,肝微粒体样品中鉴定出了3’-p-羟基紫杉醇和2-羟基紫杉醇,重组大鼠CYP3A2酶样品中鉴定出了2-羟基紫杉醇,该结果与文献报道的人体中紫杉醇的代谢结果相似。2.紫杉醇LC-MS/MS测定方法的建立 本实验建立的LC-MS/MS方法快速、可靠、简便、重现性好,线性范围为10～5000 ng/m L,批间精密度为3.40～13.04%,批内精密度为1.31～13.54%,符合生物样品测定要求,能够准确测定大鼠血浆中紫杉醇的浓度。3.消癌平注射液和漆黄素对大鼠体内紫杉醇药代动力学的影响 在消癌平注射液对紫杉醇的药代动力学影响研究中,与对照组相比,联合给药消癌平注射液20 m L/kg后,紫杉醇的AUC0→t和AUC0→∞增加了1.8倍,清除率降低了50%。在漆黄素对紫杉醇的药代动力学影响研究中,与对照组相比,联合给药漆黄素20 mg/kg后,紫杉醇的AUC0→t和AUC0→∞增加了1.6倍,Vz和CL分别降低了62%和66%;而联合给药漆黄素50 mg/kg后,紫杉醇的AUC0→t和AUC0→∞增加了1.9倍,Vz和CL分别降低了53%和56%,MRT延长至2.1倍。结论1.紫杉醇经CYP450酶催化得到羟基化代谢产物是其主要代谢途径,3’-p-羟基紫杉醇和2-羟基紫杉醇与人体中紫杉醇的代谢产物相同。紫杉醇在大鼠中的代谢结果与人体中的代谢结果相似,使用大鼠进行药代动力学研究是合理的,可以更好的将动物试验结果外推至人。2.联合使用消癌平注射液或漆黄素后,单次给药紫杉醇,联合给药组的紫杉醇药代动力学参数有显著性变化,消癌平注射液和漆黄素对紫杉醇的代谢有抑制作用,大鼠体内紫杉醇暴露量增加,二者对紫杉醇具有协同增效作用。