【摘 要】
：
公猪的繁殖性能是养殖业的重中之重,精液品质的好坏是衡量繁殖性能的重要指标之一。研究发现精液中某些蛋白与繁殖性能和精子质量相关联,可以作为高低繁殖力公猪选育的生物标签,用于生产。通过分子标记辅助选择发现,骨桥蛋白（Osteopontin,OPN）可以作为仔猪存活率的一个遗传标记,但对精子受精力的影响及发挥作用的机制尚不清楚;课题组前期对高低繁殖力公猪精液进行同位素标记相对和绝对定量（isobaric
论文部分内容阅读
公猪的繁殖性能是养殖业的重中之重,精液品质的好坏是衡量繁殖性能的重要指标之一。研究发现精液中某些蛋白与繁殖性能和精子质量相关联,可以作为高低繁殖力公猪选育的生物标签,用于生产。通过分子标记辅助选择发现,骨桥蛋白（Osteopontin,OPN）可以作为仔猪存活率的一个遗传标记,但对精子受精力的影响及发挥作用的机制尚不清楚;课题组前期对高低繁殖力公猪精液进行同位素标记相对和绝对定量（isobaric tags for relative and absolute quantitation,i TRAQ）,本研究从中筛选出谷胱甘肽过氧化物酶6（Glutathione peroxidases 6,GPx6）并研究了其对精子受精力的影响。GPxs是抵抗氧化应激的重要保护剂,据报道,该蛋白家族的某些成员在保护精子免受氧化应激中起关键作用,但对作为GPx家族成员的GPx6知之甚少。本研究旨在探究猪精液中OPN和GPx6的蛋白含量与公猪繁殖性能的相关性和对精子受精力的影响。我们分析了公猪精液中OPN和GPx6的差异表达与繁殖性能的相关性,研究了它们在公猪繁殖器官和精子中的定位,并探讨了OPN和GPx6对公猪精子活力、体外获能、顶体反应和受精效率的影响。主要结果如下:1、相关性分析结果显示,OPN蛋白（大白公猪和长白公猪）与窝产活仔数显著正相关,GPx6蛋白（大白公猪）与胎产总仔数、窝产活仔数和繁殖力呈负相关;筛选高繁殖力种公猪的可行性验证分析结果发现,OPN可作为筛选高繁殖力公猪的潜在生物标签;GPx6不能作为大白公猪筛选高繁殖力的生物标签,但结果与本课题组前期i TRAQ结果一致,即GPx6在低繁殖力公猪的精清中相对高表达。2、通过慢病毒包装体系和中国仓鼠卵巢细胞亚株真核表达体系,获得了猪源OPN蛋白。用0.1μg/m L OPN蛋白与精子共孵育3 h后,发现OPN能显著提高获能后精子的活力;免疫荧光和蛋白质印迹显示OPN主要定位在精子的头部和颈部,获能后表达增多;精子中环腺苷酸（Cyclic adenosine monophosphate,c AMP）浓度检测结果表明OPN显著提高c AMP的浓度;在猪体外受精中,发现0.1μg/m L OPN可以显著提高胚胎卵裂率。3、通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应和免疫印迹分析,发现GPx6在公猪的附睾和精清中高表达;免疫组化和免疫荧光对GPx6在睾丸组织细胞和精子细胞中进行定位,发现GPx6在大多数的早期精原干细胞中表达,且主要定位在精子的颈部和尾部,获能后表达降低;将精子与anti-GPx6抗体共孵育3 h后,发现GPx6会显著降低精子活力;通过精子膜的豌豆凝集素染色检测发现GPx6可显著降低顶体反应率;酶联免疫吸附测定检测的结果表明GPx6蛋白显著降低了精子c AMP浓度;猪体外受精结果显示GPx6会降低胚胎卵裂率。4、将猪源OPN蛋白免疫小鼠,得到猪源OPN单抗,效价为1:64000;亚型鉴定显示单克隆抗体为Ig G1,轻链类型为Kappa;通过免疫印迹检测,发现其单抗的特异性比多抗好;在应用方面,OPN单抗可以精确检测猪繁殖器官、精子、卵母细胞和卵丘细胞中OPN蛋白的表达。综上所述,本研究发现OPN和GPx6均与公猪繁殖性能有关,对两个蛋白进行研究。对于OPN蛋白,成功的得到猪源OPN蛋白和单克隆抗体,发现OPN附着在精子膜上,影响精子活力和c AMP合成,从而影响胚胎分裂率;对于GPx6蛋白,发现其在附睾和精清中高表达,并附着于精子膜上阻止精子过早获能,影响c AMP合成,从而影响顶体反应的发生。本研究对OPN蛋白和GPx6蛋白在高繁品系猪的选育、稀释液的添加提高猪精子受精力和繁殖性能等方面展开了深入研究,并对其作用机制进行分析,为探索OPN和GPx6的功能机理提供了新的线索。
其他文献
全球肥胖的患病率正持续增加,肥胖作为肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）等疾病的主要危险因素正威胁着人类的健康。目前,大约有三分之一的育龄妇女受肥胖的影响,且肥胖母亲的后代在成年后易患肥胖及相关代谢疾病。但是,母系肥胖与子代肝癌发生发展之间的关系以及其调控机制尚有待研究。本论文应用二乙基亚硝胺（diethylnitrosamine,DEN）在多代高脂喂养的肥胖母鼠后
毛泽东著作是毛泽东思想的文体基础和重要载体,它凝聚着以毛泽东为核心的党的第一代中央领导集体对于中国革命和建设重大问题的深刻思考,集中体现着中国共产党人面对困难,勇于拼搏,敢于牺牲,艰苦奋斗的革命精神,是党和人民的宝贵精神财富。回顾中国共产党的奋斗历史,党之所以能够历经艰难困苦创造一个又一个新的辉煌,很重要的原因之一就是党自成立之日起就高度重视学习马克思主义经典著作。特别是随着毛泽东思想被确立为党的
经济增长质量是指经济增长的一系列固有特征与经济发展进程的协同演进,主要表现在经济效率、经济结构、稳定性、可持续性、经济福利分配和经济权利禀赋六个方面。而经济高质量增长是指这六个方面“五高一好”的增长,即经济效率高、稳定性高、生态文明程度高、共享程度高、经济权利禀赋高和经济结构好。在国际竞争形势加剧,中国经济面临内循环发展动力不足且质量型问题凸显的现实背景下,如何利用信息通信技术资本存量（简称ICT
由于全球天然气资源禀赋存在巨大差异,其在全球的生产与消费也存在极度的不平衡,从而导致了全球天然气贸易活动十分频繁,其贸易规模也与日俱增。2017年全球天然气消费约为3.6万亿立方米,其中贸易约占总消费的三分之一,天然气贸易量同比上升超过6%。在如今多变的天然气国际贸易市场中,供应安全无疑是天然气贸易各方共同关注的重要话题之一。一方面,进口国可能会因天然气基础设施建设滞后、天然气进口多元化程度不高以
自1995年实行房屋预售制度以来,我国房地产行业取得了前所未有的高速发展,为我国国民经济的发展作出了重大贡献。虽然房地产行业高速增长的投资规模大大缓解了居民的住房需求压力,但是房地产市场的“非理性繁荣”引发了行业性的过度投资,从而积压了大量的房地产库存。针对房地产库存高企这一重大现实问题,“去库存”成为我国2016年经济社会发展以及“十三五”规划期间供给侧结构性改革的五大任务之一。在供给侧结构性改
摩擦磨损是日常生活和工程中常见的现象。虽然被广泛的关注并研究了很长时间,但由于其复杂性,许多摩擦磨损问题尚未得到彻底解决。面接触中的摩擦磨损机理对工作表面的性能、可靠性和使用寿命起着决定性的作用。所以深入了解面接触中的接触应力场、磨损分布以及不同外界压力下摩擦特性的变化具有重要意义。本文采用实验与仿真相结合的方法,分析了摩擦过程中接触应力场的变化及接触表面损伤情况,同时进行了理论分析和相关实验,研
养鹅生产是当代养禽业中蓬勃发展的一个优势产业。鹅肉产品的营养性为低脂肪、低胆固醇、高蛋白,深受广大消费者的喜爱,消费量日益增加,具有良好的生态效益、经济效益和社会效益。鹅的生长性能与生产密切相关,直接关系到鹅肉产品的供给和养殖户的经济效益,是育种工作者和科学家们一直以来都十分重视的问题。动物的生长发育主要依赖“下丘脑-垂体-靶器官”通路来完成,受到神经内分泌生长轴的调控,是一个非常复杂的问题。因此
暗褐网柄牛肝菌（Phlebopus portentosus）是一种珍贵的食用菌,属于担子菌门,伞菌纲,牛肝菌目,小牛肝菌科,脉柄牛肝菌属,主要分布在热带和亚热带区域。相比于其它普通食用菌,暗褐网柄牛肝菌具有重要的食药用价值。但是,目前还没有高质量的暗褐网柄牛肝菌参考基因组,阻碍了这种珍贵食用菌的精准育种。本研究结合Pac Bio测序技术、Hi C测序技术和Illumina测序技术,首次构建了暗褐网
氧化白藜芦醇（Oxyresveratrol,E-2,3’,4,5’-tetrahy-droxystilbene,OXY）是菠萝蜜等食材中重要的生物活性成分,具有抗氧化、抗炎、神经保护、酪氨酸酶抑制活性、抗衰老及果蔬抗菌防腐等多种生理活性。本文以菠萝蜜为研究对象,采用乙醇提取、乙酸乙酯萃取和中性氧化铝柱层析等方法分离纯化得到氧化白藜芦醇并进行结构鉴定。采用体外化学、多种细胞模型以及体内生物模型,对其
水稻（Oryza sativa L.）是我国乃至全世界最主要的口粮作物之一,其产量占我国粮食总产的50%以上,确保水稻生产安全对保障我国粮食供给和农业的可持续发展具有重大而深远的战略意义。为了满足巨大人口增长对稻米的需求,解决粮食安全问题,必须在改变现有生产方式的同时通过水稻育种技术和种质资源的创新,实现水稻品种新的突破。本研究通过航天诱变突变体rbh1的农艺性状、红褐色标记性状基因定位与克隆、功