视网膜色素变性（Retinitis pigmentosa,RP）是一种遗传性的视网膜退行性疾病,世界范围内发病率约为四千分之一,是儿童致盲的主要原因之一。视网膜色素变性以视网膜感光细胞（视锥细胞和视杆细胞）的退变为主要症状,其临床表现为病人早期出现夜盲,后期视力逐渐下降,最终完全失明。眼底成像可观察到视网膜呈现明显的骨针样色素沉积、血管萎缩、视盘蜡状苍白等表型,视网膜电图（ERG）也可检测到感光细胞电信号振幅显著降低或消失等现象。视网膜色素变性的遗传方式主要有三种,分别为常染色体显性遗传、常染色体隐性遗传和伴X连锁隐性遗传,其中伴X连锁隐性遗传方式的发病概率约占全部视网膜色素变性的10%～20%。RP2基因位于X染色体,是X-连锁视网膜色素变性的主要致病基因,其突变约占X-连锁视网膜色素变性的15%。目前世界范围内仍缺乏有效的治疗视网膜色素变性的方法。我们前期结果和其他研究人员的结果表明,大多数RP2致病突变会导致RP2蛋白不稳定,发生泛素化介导的蛋白降解,这极可能是疾病发生的原因。尽管蛋白酶体抑制剂如MG132可抑制RP2致病突变蛋白降解,但特异性低等特点限制了该类抑制剂在临床上的使用。因此,本研究拟鉴定参与RP2致病突变蛋白降解的关键因子,进而筛选相关的抑制剂,特异性抑制RP2突变蛋白降解,为RP2相关视网膜色素变性的治疗提供新的思路。本研究首先利用野生型RP2和突变型RP2（Q158P）质粒在HEK293T细胞中进行免疫沉淀,对沉淀蛋白进行质谱分析,通过筛选和验证发现了与突变型RP2特异相互作用的三个E3泛素连接酶（HUWE1、Trim28和UBR5）及E3泛素连接酶互作伴侣蛋白BAG6。利用免疫荧光实验证明了这四个蛋白与RP2-Q158P存在共定位现象。通过免疫共沉淀实验明确了该四个蛋白与其它RP2致病突变同样存在特异性相互作用。为了验证这四个蛋白是否参与RP2致病突变的蛋白降解过程,我们利用si RNA分别干扰BAG6、HUWE1、Trim28和UBR5的表达,发现敲低BAG6和HUWE1可以部分恢复RP2致病突变蛋白的水平及其蛋白稳定性。以往研究发现BAG6作为互作伴侣蛋白可以募集E3泛素连接酶参与靶蛋白的泛素化降解过程。我们通过免疫共沉淀实验,发现敲低BAG6导致HUWE1与RP2突变相互作用减弱。反之,敲低HUWE1不影响BAG6与RP2突变的相互作用,因此BAG6是通过募集HUWE1参与RP2突变蛋白的降解。利用免疫沉淀和质谱分析,我们发现RP2的268位赖氨酸（K268）通过介导与BAG6/HUWE1的相互作用参与RP2蛋白的泛素化蛋白降解过程。我们发现HUWE1特异性抑制剂BI8622处理可以恢复HEK293T细胞中的RP2突变蛋白水平,也可以恢复视网膜色素上皮细胞系ARPE-19中的RP2突变蛋白水平,并增加RP2与其伴侣蛋白ARL3的相互作用。本研究鉴定发现BAG6/HUWE1可特异性与RP2致病突变蛋白相互作用,并且敲低BAG6/HUWE1可恢复RP2突变蛋白水平。HUWE1抑制剂在体外实验中可恢复RP2突变蛋白水平,可作为RP2相关视网膜色素变性的一种潜在治疗方法。