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肾癌(RenalCellCarcinoma,RCC)是最常见的肾脏实质性恶性肿瘤。树突状细胞在肿瘤免疫中的基础地位确立以来,肾癌的免疫治疗取得了较大的进展。树突状细胞是目前公认的体内功能最强的抗原提呈细胞(antigenpresentingcell,APC),是机体内启动免疫反应的关键因素。DC摄取肿瘤抗原,提呈抗原给T淋巴细胞,诱导细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxicTlymphocytes,CTL)增殖、活化,产生特异性抗肿瘤细胞免疫。因此,构建一种以DC为基础的瘤苗,对DC进行一定的修饰,以改善肿瘤局部的微环境、增强DC的免疫功能,进而遏制肿瘤免疫逃脱。
本研究将能发挥重要抗肿瘤作用的IL-12基因转染DC,再用肿瘤粗提抗原Ⅰ致敏DC,构建成一种以DC为基础的多价瘤苗,使其在有效提呈抗原的同时又持续高分泌IL-12因子,更有效地诱导T淋巴细胞增殖、活化,进而诱导特异性抗肿瘤免疫。从分子及细胞学水平观察DC多价瘤苗体外诱导自体T淋巴细胞产生特异性抗肾癌免疫的效能,并对结果进行分析。目的:1.第一部分:树突状细胞的体外扩增培养。对传统培养方法改良,掌握从外周血单个核细胞(PBMC)中分离培养DC的方法。2.第二部分:以树突状细胞为基础的DC多价瘤苗的制备。联合用肿瘤抗原致敏和IL-12基因修饰方法,构建一种以DC为基础的多价瘤苗,并从分子水平上检测该瘤苗的免疫状态。3.第三部分:DC多价瘤苗诱导抗肾癌免疫的体外实验。在体外用DC多价瘤苗诱导T淋巴细胞增殖、活化,从细胞水平上检测该瘤苗的免疫效能。