目的:建立正常人肾盂移行上皮原代细胞的培养方法,进行致肾盂肾炎大肠杆菌(pyelonephritic E.coli or uropathogenic E.coli,UPEC)粘附特性的研究,并探讨UPEC132毒力因子对宿主细胞的毒性作用。方法:采用PCR及复合PCR方法分别扩增并检测UPEC132的papC,hly及cnf1毒力基因。进行溶血试验检测UPEC132的溶血素。选择正常人肾脏的肾盂组织进行原代细胞培养,分别比较两种常用培养方法及含血清培养基(RPMI1640等)与添加成分的无血清培养基(KSFM等)的不同培养基体系的培养结果,进行显微镜形态学观察、计数、HE染色、鉴定及成功率和污染率的统计,确定原代培养体系。进行UPEC132的细菌粘附试验,经Giemsa染色运用显微镜摄影技术观察UPEC132与正常人肾盂移行上皮原代细胞、二倍体细胞系(Vero)及人移行上皮癌细胞系(EJ)粘附后的形态学改变,计数并统计15至180分钟不同时间段的粘附率及粘附指数,比较UPEC对三种细胞的粘附特性及与宿主细胞的相互作用。试验中以标准株UPECJ96为阳性对照,无菌毛代表株E.coli K-12p678-54为阴性对照。试验数据运用SPSS软件进行t检验,x~2检验等统计学处理。结果:凝胶电泳结果显示UPEC132的papC,hly和cnf1基因片断扩增均为阳性。