DARPP32促胃癌血管生成机制及胃癌中miRNA差异表达谱发现研究

来源 :南京医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:douliangster
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:血管生成是肿瘤重要的生物学特性之一。多巴胺及环磷酸腺苷调控蛋白,分子量32000(dopamine and cAMP-regulated phosphoprotein, Mr 32000, DARPP-32)及其蛋白剪切亚型(t-DARPP)在胃癌中存在异常高表达,可能对胃癌血管生成具有调控作用。我们拟探讨DARPP-32及其亚型促进胃癌血管生成的具体分子机制。方法:通过RT-PCR, Western blot检测促进胃癌血管生成相关基因及蛋白的表达;通过荧光素酶实验检测血管生成相关转录因子转录活性;通过免疫荧光实验检测ANGPT2及STAT3在胃癌细胞内表达及分布;通过酶联免疫吸附试验检测过表达DARPP32的胃癌细胞中VEGF-a表达量;利用人脐带静脉血管内皮细胞(HUVEC)管状生成实验检测高表达DARPP-32的胃癌细胞产生的分泌型ANGPT2蛋白对肿瘤血管生成的促进作用;利用AGS和SNU-16裸鼠成瘤实验检测DARPP32过表达或表达抑制对胃癌细胞体内成瘤能力的影响。结果:DARPP-32及其剪切亚型能够明显促进ANGPT2的表达水平及血管生成能力。T34突变型DARPP-32蛋白(T34A,T34无法磷酸化)及其剪切亚型(t-DARPP,缺乏T34磷酸化位点)都有与DARPP-32类似的促血管生成作用,提示其促血管生成作用不依赖于T34位磷酸化位点。受DARPP-32刺激后可检测到分泌型ANGPT2蛋白表达增加并可促进血管生成,而利用ANGPT2抗体对分泌型ANGPT2进行拮抗后,DARPP-32的促血管生成作用明显减弱,提示DARPP-32的促血管生成作用依赖于分泌型ANGPT2的生物学作用。我们进一步对与胃癌血管生成及炎症密切相关的NF-κB和STAT3信号通路进行研究,发现DARPP-32不改变NF-κB的磷酸化和活性,但能显著增强STAT3的磷酸化及活性。体内实验发现,过表达DARPP-32可明显增强肿瘤细胞的血管生成及生长速度。通过检测人胃癌组织样本中ANGPT2、DARPP-32及其剪切亚型的表达发现,三者在胃癌组织中均异常高表达,并且在ANGPT2与DARPP-32的表达之间,及DARPP-32和t-DARPP的表达之间存在显著相关性。结论:研究结果显示,DARPP-32-STAT3-ANGPT2轴在促进胃癌血管生成方面有重要促进作用,为进一步理解肿瘤血管生成提供了有力的实验依据。目的:微小RNA (microRNAs, miRNAs)在肿瘤的发生及进展过程中发挥重要作用。而单个miRNA可以影响上百个下游目的基因表达水平,这一现象提示miRNA在肿瘤的发生发展过程与多个信号通路的调控密切相关。在本研究中,我们对非贲门部胃癌和非贲门部正常胃组织中差异表达miRNA进行了检测和分析,并将部分研究结果在贲门部胃癌中进行了比较,以期更好的发现非贲门部胃癌特异性miRNA表达谱。方法:我们采用2个不同的miRNA微阵列平台对非贲门部胃癌中差异表达miRNA候选分子进行了筛选。通过比较2个不同平台的检测结果,我们发现了17个在非贲门部胃癌中特异性高表达和12个在非贲门部胃癌中特异性低表达的miRNA分子。通过进一步的实时荧光定量PCR验证,我们发现了8个在非贲门部胃癌中差异表达的miRNA,并将这一结果在贲门部胃癌肿瘤标本中进行检测和比较。结果:通过分析我们发现miRNA-146b-5p, miRNA-375, miRNA-148a, miRNA-31,和miRNA-451在非贲门部胃癌中存在特异性差异表达;而miRNA-21(高表达)和miRNA-133b(低表达)不仅在非贲门部胃癌,而且在贲门部胃癌中也发现有异常表达;值得注意的是miRNA-200a在非贲门部胃癌肿瘤组织中异常高表达,而在贲门部胃癌组织中却异常低表达;此外,miRNA-146b-5p的表达水平和非贲门部胃癌的临床分期有显著相关性。结论:非贲门部胃癌肿瘤组织中存在特异性miRNA表达谱,这一表达谱与贲门部胃癌中的有所不同,这一差异可能提示了非贲门部胃癌和贲门部胃癌在病因学及分子信号通路方面的不同。通过进一步的功能研究,我们有可能发现和非贲门部胃癌诊断、治疗及预后高度相关的miRNA分子,更好的理解非贲门部胃癌和贲门部胃癌的发生、发展机制,为发现新的诊断、治疗途径提供实验依据。
其他文献
船舶设计项目管理是对船舶设计过程进行控制的一种管理方法,经过6年的摸索,已经在本单位船舶设计中得到充分应用。本文对船舶设计中选择什么类型的组织结构,怎样有效实施项目
<正> 这是我在芝大的最后几个月了。虽然明知道毕业前会忙得焦头烂颧,等拿到这学期的电影日程,抵不过那一大张 DOC FILMS 海报的诱惑,还是去买了张季票,在海报上用荧光笔标出
目的探究为小儿鼾症患者进行扁桃体摘除联合鼻内镜下腺样体切除手术的临床治疗效果。方法 60例小儿鼾症患儿随机分为对照组和观察组,各30例。对照组患儿进行常规手术治疗,观
通过对路面噪声来源和降噪机理的分析,提出从改变路面结构和材料类型的角度来消减和吸收噪声,并在南京绕城公路高桥门高架路段采用LNAP13降噪路面,实际测试LNAP13沥青路面的
研究目的:客运专线立项的重要依据是预测运量,同时运量预测还是客运专线经济效益计算的重要基础。因此,迫切需要提出一套铁路客运专线运量预测的模型方法,用以指导铁路客运专
目的 分析2004—2016年辽宁省甲型病毒性肝炎(甲肝)流行状况,了解甲肝疫苗纳入免疫规划前后辽宁省甲肝流行特征,为有效防控甲肝提供科学依据。方法 采用描述性流行病学方法对
[编者按]改革开放以来,深圳市实行政府体制创新,有效地克服了旧有体制的诸多弊端,提高了政府效能,为建立社会主义市场经济体制注入了活力.深圳市长于幼军的文章,介绍了深圳市
目的探讨多聚磷酸盐激酶1(ppk1)基因缺失对尿路致病性大肠埃希菌药物敏感性的影响及其机制。方法在本团队以往的研究中以尿路致病性大肠埃希菌CFT073为标准野生菌株,并成功构
传统材料一般指中国古代或近代主要运用到建筑上用于结构固定的材料,主要有砖、瓦、石灰、木材、竹材等,现在人们也将汉字图画、图形、陶瓷泥塑等列于传统材料之中。如何利用
对比分析就是根据所分析结构的特点,将其简化成一个简单的计算模型,如梁系、板架等,并应用可靠的计算公式在该计算模型下对不同船舶进行计算,将求得的数值进行对比分析,以确