【摘 要】
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研究目的由于直接从血吸虫虫体中分离纯化组织蛋白酶L难度较大,因此该研究采用基因克隆和重组表达技术,构建表达日本血吸虫组织蛋白酶L二个亚型:SjCL1和SjCL2基因的原核表达
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研究目的由于直接从血吸虫虫体中分离纯化组织蛋白酶L难度较大,因此该研究采用基因克隆和重组表达技术,构建表达日本血吸虫组织蛋白酶L二个亚型:SjCL1和SjCL2基因的原核表达系统和甲醇酵母表达系统,优化表达条件,以期获得具有生物学活性的重组组织蛋白酶L的高效表达,为进一步研究组织蛋白酶L的生化特性和生物学功能提供重组蛋白,并为今后的药物高通量筛选提供一个新的研究系统.结论①获得了可以表达具有一定组织蛋白酶L样活性的重组蛋白酶的大肠杆菌工程菌株:pGEX-SjCL1D/BL21、pGEX-SjCL2D/BL21以及酵母菌工程菌株:pPICZ α B-SjCL1/X-33、pPICZ α B-SjCL2/X-33.②分别由上述菌株表达的SjCL1和SjCL2重组蛋白的酶活性适宜的pH范围不同,提示它们的空间构象和生物学功能存在差异.③该研究新分离获得的SjCL2基因与GeneBank所报道的SjCL2基因在核酸序列上存在一定程度上的差异,由此引起的推导氨基酸序列的差别将可能导致所编码的蛋白酶对底物的特异性略有不同.二者之间的差别可能由虫株地域差异所造成.该研究所建立的表达活性重组蛋白酶的大肠杆菌工程菌株和酵母菌工程菌株为将来进一步深入研究日本血吸虫组织蛋白酶L的生物学功能以及开发疫苗或以其为靶标的药物提供了必备的物质基础.
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