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本课题分为五部分:黄芩苷、黄芩素、黄芩酶物理化学性质研究;黄芩饮片炮制工艺规范化研究;黄芩饮片炮制前后化学成分研究及其药理探讨;黄芩、黄芩片、酒黄芩、黄芩炭指纹图谱研究;黄芩饮片质量标准的制定。
1.黄芩酶物理化学性质研究。结果显示黄芩酶的活性在30℃最强,90℃可以将其灭活。以HPLC为检测手段,研究黄芩苷、黄芩素的干热稳定性,检测结果表明,黄芩苷在160℃以下密闭加热的条件下,会缓缓分解成黄芩素和葡萄糖醛酸;但是在160~200℃,伴随温度的升高,分解速率就加大;在接近其熔点时,分解速率很大,分解产物之一,葡萄糖醛酸会很快失水,变成黑色。
2.切制工艺。以黄芩苷含量为指标,采用综合分析法,分析影响黄芩苷含量的各个因素,设计黄芩饮片炮制最佳工艺为:取黄芩,蒸制60min,切薄片,80℃烘干。酒炙工艺采用黄芩苷为含量指标,采用综合分析法及正交实验设计,确定酒黄芩最佳炮制工艺为:每100kg黄芩,加黄酒10kg,130℃炒10min。黄芩炭制工艺采用黄芩苷和黄芩素为含量指标,采用正交实验设计,确定最佳炮制工艺为约200℃炒15~20min。进行十批次的中试生产证明切制工艺、酒炙工芝、炭制工艺均具有可行性。采用常温留样法,黄芩片、酒黄芩以黄芩苷为含量指标,黄芩炭以黄芩苷和黄芩素含量为指标,已经对三批不同包装的黄芩片、酒炙黄芩片、黄芩炭的稳定性进行6个月的考察,结果黄芩各饮片在6个月均很稳定。
3.炮制前后化学成分的变化。研究表明:黄芩酒炙、炒炭没有新化合物的产生,而是黄芩中所含化合物的比例发生了改变,变化规律为:黄芩中黄酮苷类化合物分解变化成为相应的黄酮苷元类化合物。
4.采用UV、HPLC法建立和比较黄芩、黄芩片、酒炙黄芩饮片和炭制黄芩饮片指纹图谱差异。结果表明UV法缺乏特征性,专一性。HPLC指纹图谱重现性较好,参照物选择黄芩苷,甲醇、0.4%磷酸水溶液、乙睛为流动相,梯度洗脱,流速1.0ml/min;检测波长277nm;柱温:28℃,数据处理采用《FingerprintNET2003betal》软件。
5.中药黄芩饮片质量标准的制定:参照《中华人民国和国药典》黄芩项下的质量标准结合本试验结果,并制定了黄芩炭的质量标准。