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本课题旨在研究小鼠骨髓和脾脏树突状细胞(dendritic cells,DC)吲哚胺2,3双加氧酶(Indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)的表达情况及对同种异系T淋巴细胞增殖的作用。使用高表达IDO的供体DC对受体进行术前输注,从中探讨其在移植排斥反应中的作用及机理,在此基础上进一步联合应用中药青藤碱,观察两者对于移植排斥反应的影响。 第一部分 小鼠DC的IDO表达及对T细胞增殖的影响 目的:研究小鼠骨髓和脾脏DC的表型、IDO的表达情况及其对同种异系T淋巴细胞增殖的作用。方法:分离诱生法培养小鼠骨髓和脾脏DC,流式细胞仪检测DC的表型,RT-PCR、Western Blot和毛细管电泳等方法测定DC在干扰素γ(Interferon-γ,IFN-γ)诱导前后的IDO表达水平及活性,并通过单向混合淋巴细胞培养观察DC在IFN-γ诱导前后刺激同种异系T淋巴细胞增殖能力的变化。结果:从每只小鼠中平均可获得1-2×10~7个骨髓DC和3-5×10~6个脾脏DC。均具有典型的树枝状突起。两类DC的MHCⅡ、CD11_c、CD80和CD86阳性表达率无明显差异(P>0.05),脾脏DC的CD8_α阳性表达率(15.46±0.85%)较骨髓DC(1.68±0.16%)明显增高(P<0.01)。在骨髓和脾脏DC中,IDOmRNA和蛋白表达水平相似,且在IFN-γ诱导后表达水平均相应升高。脾脏DC分泌的IDO具有将色氨酸分解成犬尿氨酸的活性,在IFN-γ诱导后该活性增强;而IFN-γ诱导前后的骨髓DC所分泌的IDO均只有很微弱的活性。脾脏DC较骨髓DC对同种T细胞增殖的刺激能力明显降低,在IFN-γ诱导后进一步降低,在加入IDO的特异性抑制剂1-甲基色氨酸(1-methyl-tryptophan,1-MT)后其刺激能力与骨髓DC无明显差异。结论:小鼠脾脏DC与骨髓DC的不同之处在于其有15%左右为CD8_α~+DC并可以表达有功能的活性IDO,活性IDO可能为CD8_α~+DC分泌。IFN-γ可诱