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目的:良性前列腺增生症（Benign prostatic hyperplasia，BPH）是老年男性泌尿系统常见疾病之一，严重影响着老年男性的生活质量。随着年龄的增长，老年男性血浆和前列腺器官中雌/雄激素的比例明显升高。有研究表明，雌雄激素激素比例失衡是BPH发生的重要诱因之一。目前，临床上用于BPH的药物存在诸多局限性和不良毒副作用。因此，寻找新的用于BPH治疗的药物和策略显得尤为重要。本研究在雌雄激素诱导的大鼠前列腺增生模型基础上，探究二十二碳六烯酸(Docosahexenoic acid，DHA)以及丹参酮ⅡA（TanshinoneⅡA,TanⅡA）与雷洛昔芬（Raloxifene，Ral）联合用药对BPH的治疗作用及其机制，为寻找新的BPH治疗药物提供实验参考。 第一部分 DHA对雌雄激素诱导的去势大鼠前列腺增生防治作用的实验研究 方法:在体内实验中，我们首先在雌雄激素诱导大鼠前列腺增生模型的基础上，对大鼠每天灌胃1.6 g/kg体重的海豹油(seal oil)，检测海豹油对大鼠前列腺增生的防治作用。给药处理28天后，安乐处死大鼠。称量大鼠前列腺总重及各叶重量，计算大鼠前列腺指数。对各实验组大鼠前列腺组织石蜡切片进行H&E染色，观测大鼠前列腺组织病理学改变，对大鼠前列腺上皮细胞和间质细胞计数。使用α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、增殖细胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen，PCNA)、雌激素受体α(Estrogen Receptorα，ERα)和雄激素受体(Androgen Receptor，AR)的抗体对大鼠前列腺组织切片进行免疫组化染色，检测其在各实验组大鼠前列腺组织中的表达变化。在正置显微镜下，用线性测微尺对α-actin阳性染色的平滑肌层的厚度进行定量分析;用网格测微尺对前列腺上皮和间质中PCNA、ERα和AR阳性染色细胞计数，计算阳性细胞率。为了验证免疫组化结果的准确性，采用western blot对大鼠前列腺组织中PCNA、ERα和AR进行检测及定量分析。 在体外实验中，首先采用MTT法和细胞计数法，检测不同浓度的DHA和不同的处理时间对人正常前列腺间质细胞系WPMY-1细胞和人正常前列腺上皮细胞系RWPE-1细胞增殖的影响。采用hoechst33342法检测30μM DHA处理WPMY-1细胞和RWPE-1细胞48 h对细胞凋亡的影响。采用流式细胞技术检测30μM DHA处理WPMY-1细胞和RWPE-1细胞48h对细胞周期的影响。采用Real-time RT-PCR技术，检测DHA处理24 h对细胞周期蛋白cyclin B1(CCNB1)mRNA的影响。同时，采用western blot技术，检测DHA处理细胞48 h对CCNB1和cyclin D1(CCND1)蛋白的表达的影响。采用Real-timeRT-PCR和western blot检测DHA处理对ERα和AR表达的影响。在稳定转染ERα基因的WPMY-ERα细胞和稳定转染空载体的WPMY-pcDNA细胞中，采用Real-time RT-PCR和western blot检测CCNB1的表达差异;采用流式细胞周期技术检测WPMY-pcDNA细胞和WPMY-ERα细胞周期的差别。在瞬时转染AR基因的WPMY-AR细胞和瞬时转染空载体的WPMY-PSG5细胞中，采用Real-time RT-PCR和western blot检测CCNB1的表达的差异;采用流式细胞周期技术检测WPMY-AR细胞和WPMY-PSG5细胞周期分布的差异。 结果:在体内实验中，大鼠前列腺称重结果显示，海豹油能有效降低雌/雄激素诱导的BPH大鼠前列腺重量和前列腺指数(Prostatic Index，PI)。海豹油对大鼠前列腺腹叶，背叶和前叶增生均具有相似的抑制作用。免疫组化和westernblot实验结果显示，海豹油能有效抑制大鼠前列腺腺泡外平滑肌层的厚度增加;降低前列腺上皮细胞和间质细胞中PCNA、ERα和AR的表达。体外实验研究发现，DHA能够剂量和时间依赖性抑制人正常前列腺间质细胞系WPMY-1和上皮细胞系RWPE-1的增殖。DHA能够将WPMY-1和RWPE-1细胞周期阻滞在G2/M期，并下调细胞周期蛋白CCNB1的表达。此外，DHA还能够下调WPMY-1和RWPE-1中ERα和AR的表达。与WPMY-pcDNA细胞相比，WPMY-ERα细胞中CCNB1 mRNA和蛋白表达水平升高。同时，在WPMY-ERα细胞中，G2/M期细胞百分率降低。与WPMY-PSG5细胞相比，WPMY-AR细胞中CCNB1 mRNA和蛋白表达水平升高，在WPMY-AR细胞中，G2/M期细胞百分率降低。 结论:在体内和体外实验中，DHA能够抑制前列腺上皮细胞和间质细胞增殖，阻滞细胞周期并下调细胞周期蛋白CCNB1表达，降低细胞内ERα和AR的表达水平;在前列腺间质细胞中，ERα和AR能够促进CCNB1表达，促进细胞从G2期向M期过渡。提示，DHA可能通过下调ERα和AR的表达，抑制CCNB1表达，将细胞周期阻滞在G2/M期，从而抑制前列腺上皮和间质细胞增殖，抑制BPH的发生和进展。 第二部分 TanⅡA与雷洛昔芬联合用药对雌雄激素诱导的大鼠前列腺增生防治作用的实验研究 方法:首先在雌雄激素诱导大鼠BPH模型的基础上，对大鼠每天腹腔注射24 mg/kg体重TanⅡA和灌胃0.5mg/kg体重雷洛昔芬，探究TanⅡA与雷洛昔芬联合用药(TanⅡA+Ral)对大鼠前列腺增生的防治作用。给药处理28天后，安乐处死大鼠。称量大鼠前列腺重量及各叶重量，计算大鼠前列腺指数。对各实验组大鼠前列腺组织石蜡切片进行H&E染色，观测大鼠前列腺病理学改变。使用α-SMA、PCNA、ERα和AR的抗体对大鼠前列腺组织切片进行染色，检测其在各实验组大鼠前列腺组织中的表达变化。在正置显微镜下，用线性测微尺对α-actin阳性染色的平滑肌层的厚度进行定量分析;用网格测微尺对阳性细胞计数，计算阳性细胞率。 结果:TanⅡA+Ral能有效降低雌/雄激素诱导的BPH大鼠前列腺指数，并且联合用药的抑制作用优于单独用药。TanⅡA+Ral对大鼠前列腺腹叶，背叶和前叶增生均具有显著抑制作用，联合用药对腹叶和前叶的抑制作用优于单独用药。免疫组化结果显示，TanⅡA+Ral能有效抑制大鼠前列腺腺泡外平滑肌层的厚度增加;降低前列腺上皮细胞和间质细胞PCNA的表达。此外，TanⅡA+Ral能有效抑制大鼠前列腺上皮细胞和间质细胞中ERα和AR的表达，并且联合用药的下调作用优于单独用药。 结论: TanⅡA与雷洛昔芬联合用药对雌雄激素诱导的大鼠前列腺增生有显著的治疗效果。TanⅡA与雷洛昔芬联合用药能够有效降低大鼠前列腺指数，抑制大鼠前列腺平滑增厚，降低前列腺上皮细胞和间质细胞PCNA阳性细胞率，抑制ERα和AR的表达水平，从而对BPH发挥治疗作用。提示，TanⅡA与雷洛昔芬联合用药对于治疗BPH具有显著效果，这为寻找新BPH的治疗策略提供参考。