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目的:
体外培养人正常、内异症在位及异位子宫内膜间质细胞,观察不同浓度、不同时间的PDTC对细胞增殖、凋亡及分泌RANTES的影响,探讨PDTC用于治疗内异症的可能性。
方法:
1.收集正常妇女在位子宫内膜8例,内异症患者在位及异位子宫内膜10例。
2.采用胶原酶、铜网过筛法及差时贴壁等方法分离培养子宫内膜间质细胞。
3.10-7~10-3mol/L的PDTC处理体外培养的正常、内异症在位及异位内膜间质细胞;(1)倒置相差显微镜动态观察细胞的生长特点及形态;(2)采用MTT法测定细胞的存活情况,计算细胞生长抑制率及药物半数抑制浓度(IC50值)。
4.10-7~10-3mol/L的PDTC处理体外培养的异位内膜间质细胞,48h后用流式细胞仪检测细胞凋亡率。
5.分别给予10 μg/L IL-1β、IC50 PDTC+10 μg/L IL-1 β干预刺激体外培养的正常、内异症在位及异位内膜间质细胞,通过ELISA法检测上清液中的RANTES的浓度。
结果:
1.正常内膜间质细胞的分离培养成功率为87.50%,内异症在位内膜间质细胞的分离培养成功率为80.00%,异位内膜间质细胞的分离培养成功率为60.00%。
2.PDTC对体外培养的三组内膜间质细胞的增殖有明显的抑制作用,且呈剂量时间依赖性,差异有统计学意义(P<0.05)。在位、异位间质细胞的增殖抑制率高于正常内膜间质细胞,差异有统计学意义(P<0.05),但在位和异位之间差异无统计学意义(P>0.05)。
3.PDTC处理异位内膜间质细胞48h后,与对照组相比,10-7和10-6mol/L浓度的PDTC对异位内膜间质细胞无明显促凋亡作用(P>0.05);随着浓度的升高,10-5~10-3mol/L浓度的PDTC促凋亡作用明显增加(P<0.05),但10-3mol/L和10-4mol/L间差异无统计学意义(P>0.05)。
4.PDTC预处理三组间质细胞后,细胞经IL-1β刺激分泌RANTES增加的趋势减弱,其中,内异症异位内膜间质细胞上清液中RANTES浓度显著低于单纯用IL-1 β刺激的细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。
结论:
1.PDTC可抑制内异症患者体外培养的子宫内膜间质细胞的增殖。
2.一定浓度的PDTC对异位内膜间质细胞有明显的促凋亡作用。
3.PDTC可抑制IL-1β诱导的异位内膜间质细胞分泌RANTES,将有利于干扰内异症患者盆腔内炎症反馈环的进展。