【摘 要】
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研究目的:
探讨体外冲击波(extracorporAlshockwave,ESW)和重组人胰岛素样生长因子Ⅰ(recombinant human insulin-like growth factor-Ⅰ,rhIGF-Ⅰ)联合作用对成骨细胞增殖及骨
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研究目的:
探讨体外冲击波(extracorporAlshockwave,ESW)和重组人胰岛素样生长因子Ⅰ(recombinant human insulin-like growth factor-Ⅰ,rhIGF-Ⅰ)联合作用对成骨细胞增殖及骨形态发生蛋白2 (bone morphogenetic protein-2,BMP-2)表达的影响。
研究方法:
体外培养人成骨肉瘤细胞株(MG63),制备细胞悬液(1×106cells/ml),选择最佳冲击波能量和最适rhIGF-Ⅰ浓度。将制备的细胞悬液模型分为A:ESW组、B:IGF-Ⅰ组、C:对照组、D:ESW 联合rhIGF-Ⅰ组,B、D组加入细胞因子rhIGF-Ⅰ,A、D组经最佳能量冲击波干预,对照组不处理。以台盼兰染色评估冲击波干预后的细胞存活率;扫描电镜观察冲击波作用后细胞膜形态结构变化;用MTT 比色法检测检测冲击波干预后4小时、24小时、48小时细胞的增殖和活力;收集各组细胞24小时、48小时后的细胞培养上清液,用ELISA法测定细胞培养上清液中的BMP-2 含量。
结果:
5KV,1000频次冲击波干预后,MG63细胞存活率达85%以上,且细胞表现出较高的增殖活性,与其他能量组相比,差异具有统计学意义(p<0.05)。ESW作用于MG63细胞后引起细胞膜发生疏松多孔性结构改变,细胞膜通透性增加,但细胞骨架结构并没有改变;MTT检测结果显示:rhIGF-Ⅰ浓度为100ng/ml时,对MG63细胞的促增殖活性最大;ESW和rhIGF-Ⅰ(100ng/ml)分别单独作用于MG63细胞后均能促进细胞增殖和自分泌BMP-2,两组之间在促进细胞增殖方面差异无统计学意义(P=0.13),两组间48小时后BMP-2分泌量差异具有统计学意义(p<0.05)。ESW和rhIGF-Ⅰ联合作用能显著促进MG63细胞自分泌BMP-2,并持续到48小时后,但两者联合作用后在促进细胞增殖方面与ESW组和IGF-1组相比差异无统计学意义(p=0.16)。
结论:
(1) 5kv,1000频次冲击波干预下,ESW的细胞毒效应最小,促进细胞增殖作用最强;
(2) rhIGF-Ⅰ浓度为100ng/ml时促进细胞增殖作用最强;
(3) ESW作用于MG63细胞后引起细胞膜通透性增加,细胞骨架结构没有变化;
(4) ESW和rhIGF-Ⅰ均能促进MG63细胞自分泌BMP-2,两者联合作用对促进MG63细胞分泌BMP-2 具有协同作用,但联合应用后在促进细胞增殖上协同作用不明显。
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