两栖动物由于其独特的身体结构和腺体组织可以生活在水里和陆地上,因此得到了生物学者广泛的研究兴趣。近年来,由于两栖动物的皮肤分泌物中存在着独特的化学成分,使他们获得了医药学和毒理学研究人员的青睐。本文针对两栖蛙科动物中Rana家族中的中国大绿臭蛙[Rana(Odorrana)Livida]的皮肤分泌物进行了提取和研究。通过霰弹枪分子克隆方法,发现和提取潜在的药效学活性蛋白质。在本文中,我们通过霰弹枪克隆法得到了一条全新的cDNA序列,该序列经双脱氧链终止(Sanger)测序法测序,将得到的序列送基因库中搜索同源蛋白,根据其结构和序列相关性设置活性实验进行验证。本实验通过上述方法获取了一条全新的多肽Odorrana-BI-vl,通 过 测 序 及 翻 译 得 到 其 氨 基 酸 序 列 为Gly-Leu-Leu-Ser-Gly-Lys-Ser-Val-Lys-Gly-Ser-Ile-OH。本实验使用固相合成法对该多肽进行固相合成,合成产物经RP-HPLC分离纯化后用于药理活性研究。合成产物由MALDI-TOF质谱和LC-MS质谱分析对其结构进行确证。根据NCBI-BLAST数据库匹配结果发现该多肽与Rana家族多肽odorranain-v1属于同源蛋白,拥有高度相似的高保守信号肽区域和成熟肽区域(10/12片段重叠)。针对该多肽的生物活性,本文对其进行了最小抑菌浓度(MIC)、溶血性、抗癌活性、平滑肌舒张/收缩以及缓激肽抑制活性的研究。结果表明,Odorrana-BI-vl在512mg/L时对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌及真菌的抑制活性不明显,且在该浓度下亦无明显的溶血性;该多肽对人肿瘤细胞株MB-435有轻微的选择性抑制作用,浓度为1×10-4M时的抑制率仅约为20%左右;但针对Wistar大鼠膀胱平滑肌的BK作用上,该多肽能明显抑制BK对组织的收缩作用。