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卵黄抗体(IgY)是禽体内最主要的免疫球蛋白,在禽类动物体内发挥着与哺乳动物IgG相似的作用。而且,与IgG相比,IgY还具有理化性质稳定和种系间距大的优势。但是,IgY落后的纯化手段一直是阻碍其得到广泛应用的瓶颈所在。所以,IgY亲和层析方法的建立是决定IgY技术发展的关键环节。通过从人生殖支原体基因组中克隆获取pM基因序列,与pMD-19T Simple连接构建重组载体,转化大肠杆菌DH5α,构建克隆重组菌。经酶切鉴定正确以后,将pM基因序列与pET 32a表达载体连接,连接产物转化至大肠杆菌BL21,构建重组表达菌株。在0.4mM的IPTG,20℃过夜诱导条件下诱导pM蛋白表达,SDS-PAGE分析鉴定pM蛋白在此条件下以可溶性的形式大量表达。随后,通过pull-down和蛋白免疫印记实验证明pM蛋白与鸡形目IgY、雁形目IgY、IgY-scFv和IgYΔFc均能结合,并证明pM蛋白与IgY的结合具有Fab片段依赖性。表面等离子实验验证pM蛋白与IgY的scFv的亲和力为1.922E-10M。随后,将pM蛋白与N-羟基琥珀酸亚胺活化的琼脂糖4FF偶联制备得到简易的重力纯化柱,使用此重力纯化柱在pH 3.2的条件下能够纯化出最多的高纯度IgY。SDS-PAGE将亲和纯化得到的IgY与传统方法提取的IgY纯度对比发现,与传统方法纯化获得的IgY相比,利用pM蛋白亲和纯化获得的IgY抗体的纯度有显著提高,Bandscan分析pM蛋白亲和纯化后的IgY纯度可以达到98.7%。通过间接酶联免疫反应发现,在纯化后的IgY中,IgY的浓度提升了125倍。证明pM蛋白可以作为IgY亲和纯化的配体使用。这一发现为非哺乳动物抗体及其抗体片段的纯化奠定了坚实的理论基础。