禽白血病病毒(Avian Leukosis Virus, ALV)是引起禽类患多种肿瘤性免疫抑制疾病的反转录病毒。该病毒根据其囊膜蛋白序列特征分为A-J共10个亚群。按照其传播方式,又可以分为外源性病毒和内源性病毒。近年来,J亚群禽白血病在我国广为传播,对养禽业造成巨大的经济损失。研究表明,J亚群禽白血病病毒(ALV-J)是外源性病毒和内源性病毒ev/J的重组体,而内源性禽白血病病毒在我国鸡群的存在情况以及其与我国J亚群禽白血病病毒的流行毒株间的相关性尚不清楚。本研究对我国的10种优质鸡种鸡胚中内源性禽白血病病毒的存在情况进行了检测。通过针对内源性禽白血病病毒EAV, ART-CH, e基因座,ev/J的特异性引物对鸡胚基因组进行PCR检测,结果表明：这4种内源性病毒均存在于这10种优质鸡种中。进而通过序列分析表明,所有鸡种的内源性病毒EAV序列与E51和EAV-O相比,与EAV-0的同源性更高；进化树分析亦显示,它们与EAV-0处于同一进化分支。10种品系鸡种基因组中ART-CH的gag-相关序列的核酸同源性在91.7%-97.2%之间。它们与原型株ART-CH克隆5和克隆14的核酸同源性相近,前者为92.4%-99.1%,后者为91.0%-97.3%。进化树分析表明,除了罗斯鸡和罗曼鸡与这两个原型株处于进化分支外,其余鸡种都处于独立的分支。对我国优质鸡群内的ev基因座的部分en基因进行序列分析,结果表明：它们之间的核酸同源性高达98.0%以上。进化树分析表明它们的进化路径十分相似,同时除了白来航鸡和罗曼鸡外,其余鸡种均没有和ev-1,ev-3和ev-6处于同一进化分支。通过对我国优质鸡群内的ev/J的部分env基因进行序列分析,结果表明：这些内源性病毒序列之间的同源性高达95.9%-99.1%,同时它们与外源性病毒ALV-J原型株HPRS-103之间的核酸同源性亦高达92.8%-98.1%。根据ev/J的内部缺失不同,可以将ev/J分为Type I-Ⅳ四种类型。用分别位于前病毒两侧的LTR序列U3区的引物PrimerF/PrimerR扩增全长的ev/J,结果三种外来鸡种：罗斯鸡、白来航鸡、罗曼鸡和中国本土地方鸡种：北京油鸡、狼山鸡、寿光鸡均扩增出了大小约3.8kb和2.2kb两种片段。而其余四种鸡,泰和乌鸡、苏秦草鸡、绿壳蛋鸡、浦东鸡只扩增出了大小约3.8kb的。表明ev/J在我国地方鸡种和外来引进鸡种间存在差异,同时地方鸡种之间亦有不同。为检测我国优质鸡群的基因组中是否存拥有在完整的pol基因的ev/J,用引物EVJFOR/103ER对这10个品系的鸡进行PCR扩增,结果泰和鸡和浦东鸡未扩增出片段,其余鸡种均只扩增出了大小为568bp的片段,表明这些鸡种都不含有完整的pol基因(完整的pol基因为2618bp)。经序列比对,发现568bp的片段属于2.2kb的-部分。而不具有2.2kb片段的鸡种,却扩增出568bp片段的原因可能是下游引物103ER结合2.2kb片段的部位有较大的变化所导致的。用分别位于ev/J的gag基因和env基因gp85上跨越整个po1基因缺失部位的引物H83REV/H8,对我国优质鸡群的基因组进行扩增。10种品系的鸡种均扩增出了单一片段,这些片段有三个大小,分别为638bp,661bp和728bp。表明这10种品系的ev/J在这一区域的缺失不尽相同。分析表明,扩增出638bp的鸡种(寿光鸡、狼山鸡、浦东鸡)的ev/J的缺失和TypeⅢ型ev/J出现的缺失一致；扩增出728bp的鸡种(罗曼鸡、罗斯鸡、苏秦草鸡、泰和鸡)的ev/J的缺失与Type Ⅰ型ev/J缺失一致；而扩增出671bp的鸡种(绿壳蛋鸡、白来航鸡、北京油鸡)的ev/J的缺失和Type I-Ⅳ型4种ev/J的缺失均不完全吻合,但缺失部位两侧的序列与Type I和口TypeIIIev/J的序列同源性较高,分别为97.0%-97.3%和94.0%-94.3%。这种新的ev/J缺失类型,意味着绿壳蛋鸡、白来航鸡、北京油鸡的ev/J拥有全新的gag-env的连接形式。在对PrimerF/R所扩增的2.2kb片段与四种类型的ev/J进行序列比对分析时发现：它们与TypeⅣev/J原型株EAV-HP clone4-1高度同源,而与其余3种类型ev/J相比同源性则很低；进一步分析其内部缺失时发现它们与TypeⅣ ev/J原型株EAV-HP clone4-1的缺失完全吻合。因此说明所有鸡种扩增的2.2kb的片段均属于TypeⅣev/J。在对PrimerF/R所扩增的3.8kb片段与四种类型的ev/J进行序列比对分析时发现：3.8kb片段存在两处缺失具有明显差别的位置。第一处缺失位于ev/J的gag基因编码基质蛋白(MA)的区域。在这个位置上,北京油鸡、狼山鸡、罗曼鸡、寿光鸡、苏秦草鸡的缺失与Type Ⅰ和Type Ⅱ相吻合。但其余的鸡种出现的缺失与4种类型的ev/J均不吻合。第二处缺失的位置与H83REV/H8扩增所检测缺失的位置相同。这表明H83REV/H8的引物可能就位于3.8kb片段上。它与H83REV/H8扩增产物之间高同源性也证明了这点猜想。但是进一步分析发现3.8kb片段中出现的ev/J的缺失与H83REV/H8扩增产物所表现的缺失并不完全一致。只有狼山鸡和泰和鸡两者的缺失类型是相同的。因此,同一品系的鸡基因组中可能有多种不同类型缺失的ev/J存在。这可能是ev/J在鸡基因组内存在多个拷贝本造成的,而这些拷贝本分属不同类型的ev/J。将ALV-J原型株HPRS-103以及我国不同省份流行ALV-J毒株的env基因与10种品系鸡种使用引物F7/R7扩增的ev/J基因的env基因进行比对分析,结果表明ev/J的env基因与外源性病毒ALV-J的env基因具有较高的同源性。其中,同源性最高的是泰和鸡、寿光鸡与原型株HPRS-103,为94.1%；最低的是罗曼鸡与GD1109株,为86.1%。并且,国内其他流行ALV-J毒株的env基因与10种品系鸡种的ev/J的env基因同源性则都普遍低于原型株HPRS-103与这些鸡种的ev/J的同源性。同时,经序列比对,狼山鸡、罗曼鸡、浦东鸡、寿光鸡的F7/R7扩增产物的67-68bp和80-81bp(ALV-J原型株HRPS-103的5602bp-5633bp和5645bp-5673bp的位置)的缺失以及绿壳蛋鸡609bp-610bp和罗曼鸡的552bp-553bp(ALV-J原型株HRPS-103的6144bp-6175bp)的缺失,是所有参与比对的外源性ALV-J的env基因和其余鸡种ev/J的env基因相应区域均未出现的。另外,经序列比对,ALV-J内蒙古株IMC10200的env基因(423bp-430bp处)与10种品系鸡ev/J的env基因以及别的外源性ALV-J参考毒株的env相应区域(相当于北京油鸡的F7/R7扩增产物BF7的276bp-277bp)处有着6bp的插入。此外,ALV-J内蒙古株IMC10200的env基因(669bp-679bp处)和四川株SCDY1的env基因(6042bp-6052bp处)与10种品系鸡ev/J的env基因以及别的外源性ALV-J参考毒株的env相应区域(相当于北京油鸡的F7/R7扩增产物BF7的521bp-522bp)有9bp的插入。进化树分析显示,10种品系鸡种的ev/J的env基因与外源性ALV-J的env基因之间的遗传距离较为接近,其中最接近的是原型株HPRS-103,而遗传距离最远的是内蒙古的IMC10200株。将北京油鸡、狼山鸡、罗曼鸡、罗斯鸡、寿光鸡、白来航鸡用PrimerF/R扩增得到的属于TypⅣev/J的2.2kb片段的env基因的部分与ALV-J原型株HPRS-103以及我国不同省份流行ALV-J毒株的env基因进行比对分析,结果表明它们之间也具有较高的同源性,最高的是罗斯鸡与原型株HPRS-103,为98.3%；最低的是寿光鸡与湖北省的毒株HB09-1,同源性为81.4%。所以,这些鸡种的ev/J的2.2kb片段的env基因也与HPRS-103的关系最为紧密,生物进化树也证明了这点；同时这些片段的env基因与安徽省的毒株WN100402的进化关系最远。本研究对我国优质鸡群中内源性禽白血病病毒EAV, ART-CH, e基因座,ev/J进行了检测和分析。对深入了解内源性禽白血病病毒尤其是内源性反转录病毒ev/J具有重要的意义,同时对了解ALV-J病毒亚群特性、进化等方面具有一定的理论意义。也为进一步研究不同类型ev/J对ALV-J感染所引起的免疫耐受机理打下了基础。