基于黄粉虫的细菌检测条件的建立与优化

来源 :沈阳药科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shy19780928
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酚氧化酶原激活系统是昆虫体内重要的先天性免疫机制之一。本实验以黄粉虫为实验模型,建立并优化了细菌诱导的黄粉虫血淋巴中酚氧化酶原的激活及酚氧化酶活力测定条件。以肽聚糖作为诱导因子,采用正交实验考察温度、pH、激活剂、预反应时间等因素的影响,建立体外血淋巴酚氧化酶原激活及活性测定的最佳条件如下:反应温度30℃,激活剂加入量5μl,反应pH值为8,预反应时间5分钟,其中温度和反应pH值对检测结果影响显著。大肠杆菌(革兰氏阴性菌)和金黄色葡萄球菌(革兰氏阳性菌)完整菌株可体外激活血淋巴酚氧化酶原激活系统,但所需浓度较高、检测时间较长、灵敏度较低。选用以上菌株经物理学、生物学、化学方法处理后检测其对酚氧化酶原激活系统的影响情况,筛选其最佳处理方法为优化的化学方法。利用最佳方法处理后的十种菌株中有八种菌株在菌落数为101数量级范围内,利用血淋巴酚氧化酶原激活系统可稳定检出,定量分析结果显示,不同种类的菌株,存在着反应出现时间,反应灵敏度,反应现象显著性等方面的差异。
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