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狂犬病（Rabies）是一种由狂犬病病毒（Rabies rivus，RV）引起的急性人兽共患传染病，一旦发病，死亡率几乎为100%。我国是狂犬病的高发区，随着我国宠物犬、猫数量的增加，狂犬病的防控面临更加严峻的形势。因此，急需建立一种能够用于快速检测动物狂犬病病毒血清抗体水平的方法，对接种狂犬病疫苗动物的免疫接种效果进行评估，以消除免疫不确实动物带来的潜在威胁。本研究首先以狂犬病病毒作为免疫原，免疫BALB/c小鼠，取小鼠的脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞（SP2/0）融合。以RV作为包被抗原建立的间接酶联免疫吸附试验（ELISA）作为筛选方法，经过三轮亚克隆后筛选得到1G10、3F7、3F8、5C8、5A11、6B10等六株阳性杂交瘤细胞。然后以原核表达的重组RV结构蛋白作为抗原，分别以间接ELISA和蛋白质免疫印迹（Western Blot）进行筛选，发现其中3F8株针对基质蛋白（M），6B10针对糖蛋白（G），其余四株针对核蛋白（N）。亚类鉴定结果表明，其中1G10为IgG2a亚型，3F7和3F8为IgG1亚型，5C8、5A11和6B10为IgG2b。间接免疫荧光试验表明，6B10能够与RV结合，3F8不能与RV结合。G蛋白单克隆抗体的成功筛选，为狂犬病病毒血清中和抗体的检测提供了一种备选的诊断试剂。为深入研究6B10株单克隆抗体的抗原结合特性，对6B10株单抗的的抗原结合位点进行了分析。以原核表达的形式对狂犬病病毒糖蛋白进行截短表达。经SDS-PAGE和Western Blot鉴定，各重组亚单位蛋白均成功表达。以分段表达的狂犬病病毒糖蛋白作为抗原，通过Western Blot分析表明，该单克隆抗体的抗原结合位点位于狂犬病病毒糖蛋白抗原位点比较集中的第二段亚单位蛋白上，具体位于糖蛋白的第212位到371位氨基酸之间。根据RV Fulry LEP株基质蛋白（M）的基因序列设计特异性引物，构建重组表达载体pGEX-RV-M。将重组表达载体转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞，经IPTG诱导表达，SDS-PAGE分析表明蛋白表达量较大且主要以可溶性的形式表达，Western blot分析表明融合蛋白具有良好的反应原性。使用纯化的重组蛋白作为包被抗原建立了间接ELISA方法并检测了95份血清，同时使用带有His标签的重组狂犬病病毒磷蛋白（P）（RV-His-P）建立的ELISA方法和商品化的ELISA试剂盒检测该血清。结果表明：与商品化的以全病毒作为包被抗原的ELISA试剂盒相比，使用重组P蛋白建立的间接ELISA检测方法具有更高的符合率，有望代替全病毒作为诊断抗原建立检测方法。