金龟子围食膜结构组成及增效因子对其影响的研究

来源 :青岛农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lihuihui1986712
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围食膜是大多数昆虫中肠细胞分泌的一层半透性膜状结构,成圆桶状把肠腔和中肠壁细胞分开,它具有保护中肠上皮细胞、阻止有害物质侵入和帮助消化等多种功能。因而将围食膜作为害虫生物防治的新靶标,破坏围食膜这一道物理屏障,即能促进病原物对昆虫的侵染。因此研究昆虫围食膜的结构与组成以及破坏围食膜的分子机理,将会提高微生物杀虫剂的杀虫效果,且对促进生物防治在农业生产中的应用具有指导意义。本研究采用生化技术和分子生物学技术等手段,对华北大黑鳃金龟(Holotrichiaoblita)和暗黑鳃金龟(Holotrichiaparallela)围食膜的结构组成及增效蛋白和荧光增白剂FB28对其围食膜的作用与影响进行分析。具体结果如下:   1.华北大黑鳃金龟和暗黑鳃金龟的围食膜均为一层无色透明、厚薄均匀的长管状薄膜,表面光滑致密,富有弹性,但与多数昆虫围食膜相比韧性较差。   2.围食膜主要由蛋白质、糖和几丁质组成,采用Bradford法测得华北大黑鳃金龟和暗黑鳃金龟围食膜蛋白质的含量分别为36.25%和38.17%,采用苯酚-硫酸法测得华北大黑鳃金龟和暗黑鳃金龟围食膜糖的含量分别为8.91%和9.08%。   3.SDS-PAGE分析华北大黑鳃金龟围食膜蛋白种类较多,有28条多肽比较清晰,分子量多在17.6kDa到320.3kDa之间。暗黑鳃金龟围食膜蛋白种类也较多,有15条多肽比较清晰,分子量多在28.8kDa到170.0kDa之间。   通过粉纹夜蛾肠粘蛋白(TnPM-ⅡM)特异多抗进行Westernblot,表明鳞翅目昆虫围食膜中有与TnPM-ⅡM特异多抗起交叉反应的多种蛋白,而金龟子围食膜中未发现与TnPM-ⅡM特异多抗起交叉反应的蛋白。   4.棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白处理鞘翅目金龟子和鳞翅目昆虫围食膜,鳞翅目昆虫围食膜蛋白多肽均有不同程度的降解,金龟子围食膜蛋白多肽未有降解现象,说明棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白对金龟子围食膜没有作用,进一步分析表明鞘翅目金龟子和鳞翅目昆虫围食膜蛋白组成等方面存在差异。   5.荧光增白剂FB28离体处理华北大黑鳃金龟和暗黑鳃金龟围食膜,多数蛋白多肽被解离,且随处理时间的增长,蛋白被解离的量增大。结果表明,围食膜蛋白主要是几丁质结合蛋白,荧光增白剂FB28可使几丁质结合蛋白从围食膜上解离下来。   6.荧光增白剂FB28喂食华北大黑鳃金龟和暗黑鳃金龟,实验表明荧光增白剂FB28对围食膜的破坏作用是短暂的、可逆的。喂以荧光增白剂后,围食膜破坏,幼虫若取食新鲜食物可促使荧光增白剂从中肠中排出,造成了荧光增白剂作用的可逆性。
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