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EB病毒(Epstein-Barr virus, EBV)是公认的DNA致瘤病毒,现己确认EBV感染与部分胃癌发生密切相关,但发病机制有待进一步研究。EBV感染可诱导相关抑癌基因启动子区呈高甲基化状态,这被认为是引起EBV相关肿瘤抑制基因功能失活的重要机制之一。目的检测并比较分析部分胃癌细胞系及EBV相关胃癌(EBV-associated gastric carcinoma, EBVaGC)和EBV阴性胃癌(EBV-negatived gastric carcinoma, EBVnGC)组织中LOXL1基因甲基化状态及其转录表达,探讨EBV感染对LOXL1基因启动子区甲基化状态及其转录表达的影响,为进一步研究LOXL1基因在EBVaGC发生中的作用机制提供实验基础。方法采用甲基化特异性PCR (Methylation-Specific PCR, MSP)和亚硫酸氢盐基因组测序法(Bisulfite genomic sequencing, BGS)检测EBV阴性和阳性胃癌细胞系以及EBVaGC和EBVnGC组织中LOXL1基因启动子区的甲基化状态。用5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对EBV阳性胃癌细胞系进行去甲基化处理,MSP及BGS检测LOXL1基因启动子区甲基化状态的变化。采用实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR, Real-time qPCR)检测比较EBV阴性胃癌细胞系、EBV阳性胃癌细胞系之间以及5-Aza-CdR作用前后EBV阳性胃癌细胞系之间LOXL1基因转录表达水平的差异。结果①胃癌细胞系MSP结果显示：3种EBV阳性胃癌细胞系SNU719, GT38,GT39和4种EBV阴性胃癌细胞系MKN-45,SGC7901,HGC-27,BGC-8234中LOXL1基因启动子区均呈M+U型。②胃癌细胞系BGS结果显示：3种EBV阳性胃癌细胞系中LOXL1基因启动子区有大多数CpG位点呈现甲基化状态,EBV阴性胃癌细胞系中未发现甲基化位点,EBV阳性胃癌细胞系甲基化程度明显高于EBV阴性胃癌细胞系。③胃癌组织MSP结果显示：EBVaGC和EBVnGC组织中LOXL1基因启动因子区也均表现为M+U型,但EBVaGC组织中LOXL1基因启动子的甲基化程度较EBVnGC组织高。④部分胃癌组织BGS测序结果显示：不同胃癌组织标本中LOXL1基因启动子区的20个CpG位点呈现不同的甲基化关态,甲基化程度存在一定异；其中EBVaGC组织中LOXL1基因启动子区有更多的CpG位点呈现甲基化状态,总体甲基化程度高于EBVnGC组织。5-Aza-CdR处理后EBV阳性胃癌细胞系MSP及BGS结果显示：LOXL1基因启动子区甲基化程度降低。⑥Real-time qPCR结果显示：通过比较差异倍数2-△△Ct,EBV阳性胃癌细胞系和EBV阴性胃癌细胞系间LOXL1基因的转录表达水平存在一定的差异,EBV阴性胃癌细胞系LOXL1基因转录表达水平为EBV阳性胃癌细胞系的4.35倍；5-Aza-CdR去甲基化处理后EBV阳性胃癌细胞系中LOXL1基因转录表达水平比处理前有2.33倍的升高。结论EBV阳性胃癌细胞系及EBVaGC组织中存在LOXL1基因启动子区的异常甲基化,EBV感染可诱导LOXL1基因启动子区的高甲基化状态,并通过高甲基化下调细胞中LOXL1基因的转录表达,进而在EBV相关肿瘤的发生发展中发挥一定作用。