两种多糖对齐口裂腹鱼肠道消化酶、形态及菌群的影响

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本文研究了不同鱼龄齐口裂腹鱼(体重在100~300g之间(大鱼:300±0.15g,中鱼:200±0.15g,小鱼:100±0.15g)肠道形态及菌群,包括:肠道中嗜水气单胞菌、乳酸杆菌、芽孢杆菌的分离鉴定及其产酶能力的研究,不同鱼龄鱼齐口裂腹鱼后肠肠道菌群的PCR-DGGE结果分析以及不同鱼龄齐口裂腹鱼肠道组织形态的分析。同时,研究了日粮中添加氧化魔芋葡甘聚糖(Oxidized Konjac Glucomannan, OKGM)和抗性淀粉(Resistant Starch, RS):0(对照组)、3.2%(氧化魔芋葡甘聚糖高剂量组H-OKGM)、1.6%(氧化魔芋葡甘聚糖中剂量组M-OKGM)、0.8%(氧化魔芋葡甘聚糖低剂量组L-OKGM)、6.4%(柠檬酸抗性淀粉高剂量组H-RS)、3.2%(柠檬酸抗性淀粉低剂量组L-RS)对齐口裂腹鱼肠道消化酶、肠道形态、后肠肠道菌群的PCR-DGGE结果以及对嗜水气单胞菌、芽孢杆菌和乳酸杆菌的数量的影响,以期为OKGM和RS这两种多糖作为功能性添加剂的进一步开发利用提供理论依据。主要结果如下:1、齐口裂腹鱼肠道形态及菌群分析结果:从健康齐口裂腹鱼肠道中分离的3株气单胞菌菌株,均为致病性嗜水性气单胞菌;分离到的三株芽孢杆菌中YB-08为解淀粉芽孢杆菌,YB-03和YB-20为枯草芽孢杆菌,三株菌株均能产蛋白酶和淀粉酶,且产酶能力稳定,产酶活性高;分离到的6株乳酸菌中RS-01和RS-04为短乳杆菌(Lactobacillus brevis),分离株RS-02和RS-06为棒状乳酸杆菌(Lactobacillus coryniformis),分离株RS-03和RS-09为弯曲乳酸杆菌(Lactobacillus curvatus);大、中、小鱼肠道菌群的PCR-DGGE结果表明,大、中、小鱼相似性系数均处在中等相似范围内,但是中鱼组和小鱼组的相似度更高,且鱼龄对齐口裂腹鱼肠道菌群的丰富度有一定影响,大鱼组肠道内容物微生物菌群多样性最丰富;肠道组织切片结果表明,肠道肠绒毛高度、内环肌层厚度、外纵肌层厚度均随鱼龄增长而提高,但是小鱼前、中肠粘膜上皮高度均高于大、中鱼(p<0.05)。2、两种多糖对肠道基础指标和消化酶的影响:饲料中不同OKGM和RS的添加量对齐口裂腹鱼的肠长指数和肠体指数无显著影响(p>0.05)。饲料中添加OKGM和RS对齐口裂腹鱼后肠肠道蛋白酶活力具有显著影响,且添加量不同影响效果也不同;对中、后肠淀粉酶活力具有显著影响,且OKGM的影响效果要大于相同添加量的RS;对前肠脂肪酶活力无明显影响,但是能明显提高中肠脂肪酶活力显著降低后肠脂肪酶活力。不同剂量的OKGM在中肠与后肠中的作用效果不同,中肠中随着剂量增加而增加,后肠中剂量的效果最好。3、两种多糖对肠形态结构的影响:对肠道形态结构的影响:1)前肠:饲料中添加OKGM均可显著提高前肠肠绒毛高度、粘膜上皮高度(p<0.05)和降低内环肌层厚度、外纵肌层厚度,且L-OKGM组作用效果最明显;饲料中添加RS均降低了前肠肠绒毛高度、粘膜上皮高度、内环肌层厚度、外纵肌层厚度,且L-RS组作用效果大于H-RS组。2)中肠:饲料中添加OKGM可提高中肠肠绒毛高度降低中肠内环肌层厚度、外纵肌层厚度,H-OKGM组和M-OKGM组均降低中肠粘膜上皮高度,但L-OKGM可提高中肠粘膜上皮高度;饲料中添加RS降低了中肠肠绒毛高度、粘膜上皮高度、内环肌层厚度、外纵肌层厚度,且H-RS组的肠绒毛有轻微损伤。3)后肠;饲料中添加OKGM能提高后肠肠绒毛高度、内环肌层厚度、外纵肌层厚度,但对粘膜上皮高度有所降低,不同剂量之间无显著差异;RS能降低后肠绒毛高度、粘膜上皮高度、外纵肌层厚度,但对内环肌层厚度有所提高,且两个剂量组除了肠绒毛高度外其它指标均有明显差异。4、两种多糖对后肠肠道菌群的影响:RS和RS添加量对齐口裂腹鱼肠道菌群的相似性系数无明显影响,低剂量的OKGM组与对照组的相似性系数最低(67.2),OKGM中、高剂量之间无显著差异;低剂量的RS组与对照组的相似性系数为76.2,高剂量的OKGM组与对照组的相似性系数为68.6。饲料中添加OKGM可提高齐口裂腹鱼后肠肠道菌群的多样性,且1.6%的OKGM组较对照组提高了10.20%。饲料中相同添加量的RS会降低肠道菌群多样性指数,但是未达到显著水平(p>0.05)。5、两种多糖对肠道嗜水气单胞菌属和芽孢杆菌属的数量的影响:RS和OKGM均能有效抑制齐口裂腹鱼体内中、后肠嗜水气单菌的生长,其中后肠效果最明显。并且随着多糖添加量的增加,体内抑菌效果也有所增强。RS和OKGM均能有效促进齐口裂腹鱼体内前、中、后肠芽孢杆菌、乳酸杆菌的生长,且后肠效果最明显。并且添加量的不同,效果也有所不同。
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