目前,癌症依然是当今世界的难题,全世界发病率最高的癌症是肺癌,其次是乳腺癌,随着生态环境的恶化和生活节奏的加快,癌症在人群中的发病率逐年增高,每年大约新增100万癌症患者,而早期诊断和早期治疗已经被医学界认为是解决癌症最有效的方法。肿瘤标志物是反映肿瘤存在和生长的一类物质,通过肿瘤标志物相关参数的变化可以获得大量的肿瘤生长信息,也为早期癌症诊断提供了依据.噬菌体表面展示技术在癌症肿瘤标志物的筛选中得到广泛应用,用pKE-2质粒经卡那抗性筛选富集开放阅读框架(open-reading frame ORF)内阳性克隆,构建阅读框架内乳腺癌噬菌体表面展示文库可以提高筛选效率。方法：用Trizol试剂提取乳腺癌组织总RNA,分离纯化mRNA,经反转录合成双链cDNA。在双链cDNA末端加上定向EcoRⅠ和HindⅢ接头,用EcoRⅠ和HindⅢ消化接头,使形成两端分别带有EcoRⅠ和HindⅢ粘性末端的双链cDNA,将其连接于带有EcoRⅠ和HindⅢ末端的pKE-2质粒载体,转化大肠杆菌DH5a,经卡那抗性筛选,富集ORF克隆.回收ORF内双链cDNA片段,将其连接于带有EcoRⅠ和HindⅢ粘性末端的T7 Select 10-3b载体,经体外包装后,以BLT5615为受体菌构建T7噬菌体展示文库。结果：经过ORF筛选,文库中ORF克隆比例达到80%,较筛选前的5%提高75%。经测定,文库滴度为2.85×105pfu／mL,重组率为99%,扩增后文库滴度为2.65×109pfu／mL。对随机挑取的50个噬菌斑进行PCR鉴定,大部分插入片段在0.25-1kb之间。