目的冠心病血瘀证是冠心病最常见的中医证型之一,目前,研究已从影像学、常规生化检测、基因多态性、转录组学、蛋白组学、代谢组学等多方面展开。为了丰富冠心病血瘀证的微观辨证,本文从循环miRNA角度研究其对冠心病血瘀证的影响。通过检测冠心病慢性血瘀证血浆miRNA的表达变化,研究冠心病慢性血瘀证的特征miRNA指纹图谱及miRNA调控网络,探讨miRNA与冠心病慢性血瘀证证候本质之间的关系,并探索miRNA如何通过网络调控作用对冠心病慢性血瘀证造成影响。方法(1)通过“高脂饲养+异丙肾上腺素腹腔注射”的方法建立慢性心肌缺血血瘀证大鼠模型。建模成功后,取大鼠心脏及血浆,使用Agilent miRNA芯片对来源于Sanger microRNA数据库(miRBase)的719个大鼠miRNA进行筛选。并利用生物信息学技术对差异表达的miRNA进行Gene Ontology(GO)分析及pathway分析。(2)收集冠心病慢性血瘀证患者的血浆,使用Agilent miRNA芯片对来源于Sanger microRNA数据库(miRBase)的2006个人类miRNA进行筛选。并利用生物信息学技术对差异表达的miRNA进行GO分析及pathway分析。(3)通过对比大鼠心脏、血浆及人血浆miRNA表达变化的异同点,构建冠心病慢性血瘀证指纹图谱。并在此基础之上,构建关键miRNA-显著性靶基因及关键miRNA-显著性pathway调控网络,探索冠心病慢性血瘀证的证候本质。(4)对关键的miRNA差异分子进行RT-qPCR验证,探索其作为冠心病慢性血瘀证生物标记物的价值。结果(1)大鼠miRNA芯片结果显示,慢性心肌缺血血瘀证大鼠,其心脏组织中有21个miRNA的表达发生了显著性变化,其中15个上调,6个下调;其血浆样品中有31个miRNA的表达发生了显著性变化,其中18个上调,13个下调。心脏与血浆同时发生变化的miRNA有9个。其中心脏与血浆发生相同变化的miRNA有7个,在心脏与血浆中发生相反变化的miRNA有2个。而其它的miRNA有些在心脏发生变化,在血浆不发生变化;有些在血浆发生变化,在心脏不发生变化。(2)人血浆miRNA芯片结果显示,冠心病慢性血瘀证患者血浆中有22个miRNA的表达发生了显著性变化,其中9个上调,13个下调。(3)利用生物信息学手段,分别对大鼠心脏、大鼠血浆、人血浆差异miRNA进行了GO和pathway分析,发现冠心病慢性血瘀证早期首先主要发生改变的GO对应的生物学过程为信号转导、细胞通讯、核酸代谢、转运、蛋白代谢、代谢、能量代谢、细胞生长与维持,细胞凋亡及免疫应答。主要发生改变的pathway为syndecan-1(多配体蛋白聚糖1)介导的信号事件、glypican(磷脂酰肌醇蛋白聚糖)通路、ErbB受体信号网络、整合素家族细胞表面相互作用、TRAIL信号通路、肝脏激酶B1(LKB1)信号事件、内皮素、凝血酶/蛋白酶激活受体信号通路、肝细胞生长因子受体介导的信号事件、VEGF/VEGFR信号网络、S1P通路、质膜雌激素受体信号通路。这些改变与血管内皮功能、能量/物质代谢、细胞增殖/凋亡、细胞信号传导、细胞生长、干细胞分化、炎症反应、血管新生、免疫反应、血小板聚集、自噬等病理/生理过程密切相关。这与以往转录组学、蛋白组学、代谢组学得到的结果高度吻合。(4)通过构建关键miRNA-显著性靶基因及关键miRNA-显著性pathway调控网络发现,能量代谢相关的脂肪酸代谢、干细胞潜能性调节相关的信号通路,纤维化相关的TGF-β信号通路,细胞增殖/凋亡相关的mTOR信号通路,心功能相关的肾上腺素能信号通路、凝血/纤溶系统失衡相关的血小板激活等发生了显著性变化。其中癌信号通路、PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路、癌蛋白聚糖、Ras信号通路5条代谢通路的连接度最大,是网络中最重要的节点。这印证了以往转录组学、蛋白组学、代谢组学得到的结果,说明miRNA是这些组学调控的关键节点,是病理过程发展过程的核心。(5)筛选了用于冠心病血瘀证RT-qPCR检测的两个内参,并发现miR-223-3p,miR-24-3p,miR-106b-5p在冠心病慢性血瘀证患者发生显著性改变,具有作为冠心病慢性血瘀证生物标志物的潜能。结论与冠心病急性血瘀证不同,冠心病慢性血瘀证早期首先是血管内皮功能,能量/物质代谢,细胞增殖/凋亡,细胞信号传导、炎症反应、免疫反应、血小板聚集等生理过程发生病理改变,发展到中、后期才会出现心肌损伤、纤维化等通路的改变。揭示了冠心病慢性血瘀证的病理机制很有可能在于炎症反应、免疫反应、缺氧及血管内皮生长因子/血小板因子诱发的能量代谢障碍与细胞增殖/凋亡程序的启动。这有利于我们更好的认识冠心病血瘀证的证候本质。