背景与目的：化疗是临床公认的恶性肿瘤全身系统治疗的有效技术手段。不过，化疗存在明显个体化差异，无效化疗不仅无法使患者从中获益，而且可能会加重患者的身体负担。寻找一种行之有效的肿瘤药物敏感性检测方法，是实现癌症患者精准化疗的前提条件。胶原凝胶滴包埋培养法药物敏感性检测技术(Collagen gel droplet culture drug sensitivity test，CD-DST)，是一种基于原代肿瘤细胞三维立体培养的新型化疗药物敏感性检测技术，已经在多种实体恶性肿瘤上得到应用，并逐渐被临床认为是一种有效的化疗药物敏感性检测方法。不过，令人遗憾的是，中国相关的临床研究报道还比较少，缺少配套产业化检测试剂盒，是制约中国临床应用研究的重要原因。针对这一现状，本研究首先研制基于肿瘤细胞三维立体培养技术的药敏检测试剂盒，并进行质量控制标准的研究，为试剂盒的产业化奠定基础;其次，对自制试剂盒的临床检测性能在四种高发实体癌上进行初步的应用评价，积累基于中国癌症患者人群的研究数据。　　方法：(1)通过对试剂盒主要原材料胶原蛋白、增殖用培养基、染色剂的的对比筛选以及其应用条件的摸索，确定最适原料及其工作条件。同时以细胞株A549为试剂盒质量控制参考品，摸索建立相关质量控制标准。(2)收集临床新鲜乳腺癌、非小细胞肺癌、结直肠癌、胃癌组织标本，用自制试剂盒与日本进口对照试剂盒进行检测性能的平行对比，同时在上述四种癌上进行的临床应用研究，统计分析检测结果与临床预后的相关性。　　结果：(1)选择了collagen typeⅠ、无血清培养基、中性红染色液作为本试剂盒主要组分的原材料。在进一步摸索测试中，确定试剂盒的基本检测条件，胶原的最佳配制体积比例为胶原溶液：10×F12培养基：胶原重构缓冲液=8：1：1、胶原凝胶溶液与细胞悬液的配制体积比为不小于10∶1，固化条件为37℃静置，凝胶固化时间为30min，最佳细胞接种浓度为2×105～5×105个/mL;无血清培养基的最适培养时间为5～7天;中性红染色液的最适工作浓度为1∶100，最适染色时间为2小时，37℃、5％CO2细胞培养箱染色可防止中性红结晶;MACS仪器分离原代细胞与手工方法对比，回收细胞活性相当，但处理效率提升。通过对用于参考品制备的细胞株A549三级库的检测，STR图谱检测表明A549细胞株在各级库中的遗传性状稳定可溯源，无菌检测和支原体检测表明各级库的冻存细胞株未受微生物污染，增殖率实验表明细胞的增殖比率不低于5，顺铂检测的药物敏感性为高度敏感;成纤维细胞的占比限度不超过70％不对实验结果造成影响;自制试剂盒与进口对照试剂盒比较，二者检测性能相近，粗一致性结果为97.53％，Kappa值为0.936(P＜0.01)，结果符合良好。(2)自制试剂盒的标本可评价率为92.41％，体外有效率与临床有效率的相关性系数为r=0.788(p＜0.01)。临床回访结果显示，回访期内自制试剂盒检测乳腺癌患者高度敏感组与低度敏感组的总体生存和无进展生存均存在差异显著性(P＜0.05)，结直肠癌、非小细胞肺癌、胃癌的总体生存均差异无显著性(P＞0.05)，而其无进展生存存在差异显著性(P＜0.05)。　　结论：成功建立了基于肿瘤细胞三维培养的化疗药物敏感性检测试剂盒、质量控制参考品及相关标准，试剂盒的检测性能与进口试剂相当，可替代进口试剂;通过初步的临床应用研究发现，药敏检测体外累积有效率与药物的临床有效率之间存在显著相关性，临床回访结果表明该技术对临床化疗预后的预测有统计学意义，具有潜在的临床应用价值。