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研究背景和目的: 对于各种终末期肝病,原位肝移植(orthotopic liver transplantation,OLT)理论上应是最为理想的治疗选择,但有一定的局限性。肝细胞移植与原位肝移植比较,具有操作简单、可重复性强、一肝可以多用、供肝细胞免疫原性低且可冻存、移植失败或产生免疫排斥后对受体影响小等优点;此外,肝细胞在体外还可以进行基因修饰,是一个良好的基因治疗载体。近年来,肝细胞移植在理论与技术方面均取得了很大进展,在许多方面都呈现出成为OLT替代治疗方案的潜力。 人骨髓来源的造血干细胞(hemtopoietic stem cell,HSCs)可以分化为骨、软骨、脂肪和肌细胞等多种细胞。目前研究发现,在适当的条件下,骨髓干细胞也可以分化为具有肝细胞功能的肝细胞样细胞。目前,关于成人骨髓干细胞向肝细胞诱导分化的国际报道有一篇,国内尚无相关报道;关于诱导分化细胞的冻存方法国内外尚无相关报道。 本实验主要研究目的:1)在体外诱导人骨髓来源的干细胞向肝细胞分化;2)对诱导分化的肝细胞进行形态和功能鉴定;3)观察经诱导分化的肝细胞冻存、复苏后的功能变化。 实验方法: 1.采用体外细胞培养的方法培养人的骨髓干细胞,在含有肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)、白细胞抑制因子(Leukocyte inhibitory factor,LIF)、纤维母细胞生长因子(Gibroblast growth factor,FGF)等的诱导培养基中进行细胞