研究目的:探讨PTP1B的敲低是否抑制胶质瘤细胞的增殖,迁移和侵袭,以及潜在的机制。研究方法:体外培养神经胶质瘤细胞系U87。设计并合成PTP1B干扰质粒,以慢病毒为载体转染到U87细胞中,同时用空质粒转染到U87细胞中作为对照组,记为空载组(shNC组)。通过蛋白质印迹法测定空载组和PTP1B基因特异性shPTP1B组的U87细胞中PTP1B的蛋白表达水平,验证基因敲低PTP1B表达的效率。证实shPTP1B组中PTP1B表达水平降低后,通过MTT增殖试验和集落形成试验检测PTP1B对U87细胞增殖的影响。采用流式细胞仪检测PTP1B敲低后U87细胞的细胞周期变化。采用western blot检测细胞周期蛋白CDK、E2F、CyclinD1、P21蛋白表达强度。进行细胞划痕试验以检测shNC组和PTP1B基因特异性shPTP1B组U87细胞的迁移能力。用Transwell小室实验检测shNC组和shPTP1B组U87细胞侵袭能力。最后通过Western blot法检测Src/Ras、PI3K/AKT、p62DOK/RasGAP相关信号(Src,pSrc418,AKT,P-AKT,ERK,p-ERK)蛋白的表达水平,揭示PTP1B影响神经胶质瘤生长的分子机制。结果:制备PTP1B干扰质粒,并以慢病毒为载体转染到神经胶质瘤细胞系U87中。结果显示western blot实验表明转染shPTP1B的U87细胞中PTP1B蛋白的表达水平显著降低。MTT和集落形成实验结果表明,PTP1B敲除后U87细胞的增殖受到显着抑制;细胞划痕试验和Transwell小室实验表明,PTP1B敲低显着抑制U87细胞的迁移和侵袭。流式细胞术显示PTP1B敲低导致了U87细胞的周期抑制。western blot发现PTP1B敲除后的U87细胞中CDK、E2F、Cyclin D、P21等细胞周期相关蛋白的表达出现显著变化,U87细胞出现了周期阻滞。同时,Src介导的信号通路中,p-Src418、p-AKT、p-Erk的表达水平均有下调。结论:通过本研究,我们的数据表明,PTP1B在胶质瘤细胞的增殖、转移和侵袭中起着关键作用,PTP1B基因的下调在体外明显抑制肿瘤生长,肿瘤细胞在体外的迁移、浸润也受到抑制,这与Src的异常表达有关,它增加了细胞内Src的活性,参与了胶质瘤细胞的增殖,迁移,侵袭和耐药等恶性表型的调节。因此,PTP1B可能是反映神经胶质瘤侵袭性的新生物标志物。靶向抑制PTP1B可能是治疗胶质瘤的一种新方法。