胶原酶产生菌的筛选及胶原蛋白短肽的研究

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胶原蛋白是一种白色、不透明、无支链的天然的纤维蛋白质,它广泛存在于动物的皮肤、骨骼、牙齿、肌腱韧带和血管中,是哺乳动物体内含量最丰富的蛋白质之一,其主要功能是维持皮肤和组织器官的形态和结构,起到支撑器官和保护机体的功能。鱼类骨骼和结缔组织的主要成份是胶原蛋白。近年来,随着胶原蛋白提取技术的发展和其结构、性质等的深入研究,其水解产物和多肽的生物功能也逐渐被广泛认识,胶原蛋白的应用成为生物、医学、食品、化妆品等领域一具新的研究热点。本实验首先采用鳕鱼皮为原料,通过酸法提取胶原蛋白;其次从海鲜市场采集来的污泥以及从海边采集来的土样中,利用察氏培养基、胶原蛋白培养基和明胶筛选培养基筛选出能够产生胶原酶的微生物菌种后,通过生理生化实验确定能够产生胶原酶的菌种,诱导其产生胶原酶,分离并测定其酶活;然后将提取出的胶原蛋白与胶原酶按照一定的比例和时间进行酶反应,以确定酶反应最佳条件。最后采用SDS-PAGE凝胶电泳来分析所得到的胶原蛋白短肽,并对其及底物的吸水性、吸油性、起泡性及其稳定性进行研究。实验结果表明:从两种土壤中筛选出来的菌种,通过对菌株进行的生理生化实验后,通过各项指标进行分析鉴定,初步确定为芽孢杆菌属的,一株产胶原酶的菌株。对它产生的胶原酶进行分离和活力测定,得到其活力为44.982U/mL。结合SDS-PAGE凝胶电泳技术发现,该酶能有效水解鱼皮胶原蛋白,并且在与胶原蛋白以2:1,37℃反应10h后能使分子量为100ku左右的胶原蛋白水解成分子量为8ku左右的短肽,将胶原蛋白与胶原蛋白短肽的性质进行比较得出随着分子量的降低,胶原蛋白的吸水性明显增加,胶原蛋白水解后,吸油性也随之降低,胶原蛋白的起泡性随水解产物分子量的下降而下降。
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