论文部分内容阅读
【目的】妊娠期糖尿病(Gestational Diabetes Mellitus, GDM)是产科常见病,其合并症与并发症多,严重危及母儿健康。胰岛素抵抗(Insulin Resistance,IR)是妊娠期糖尿病与2型糖尿病共同的病理生理基础,胰岛素抵抗依赖于TLR4和NF-кB的活化反应。基础医学研究中发现LPS—TLR4—Nf-κB通路能介导大量释放炎症因子,是一个较为经典的炎症通路。本试验在体外用内毒素刺激,建立这样的炎症通路,观察LPS—TLR4—Nf-κB通路在妊娠期糖尿病、正常孕妇以及育龄期妇女外周血单个核细胞中的作用,比较TLR4及NF-κB mRNA在三组中的表达是否有差异,以及三组单个核细胞培养液中炎症因子(IL-1、IL-10、TNF-a)的释放水平,探讨LPS—TLR4—Nf-κB通路介导的炎症因子释放在GDM发病中作用。【方法】实验研究对象的纳入:新诊断妊娠期糖尿病孕妇(依据我国妊娠合并糖尿病临床诊断与治疗推荐指南)、正常孕妇以及育龄期妇女各20例,存在胎膜早破、先兆早产以及合并其它潜在的炎症者均不纳入本次研究的范围。体外模拟炎症:抽取外周静脉血5ml,分离出单个核细胞,用内毒素(lipopolysaccharide,LPS)体外刺激并培养细胞观察LPS—TLR4—Nf-κB通路在GDM患者主要环节标志物表达,RT-PCR(reverse transcription PCR)法检测TLR4(toll like recepter 4)及核因子κB(Nf-κB)mRNA的表达。炎症因子的测定:ELISA法检测培养液中IL-1、IL-10、TNF-a水平。【结果】GDM组与正常孕妇组及育龄期妇女组TLR4、Nf-κB mRNA表达存在差异(p=0.000),差异有统计学意义。GDM组及正常孕妇组TLR4与Nf-κB mRNA表达水平存在相关性(rGDM=0.768,r正常孕妇=0.833),且相关性良好。育龄期妇女组TLR4与Nf-κB mRNA表达水平也存在相关性(r 育龄期妇女=0.719),相关性稍差。GDM组IL-1、IL-10以及TNF-α表达水平分别为:66.15±1.66、43.32±0.87及4.71±0.27,正常孕妇组IL-1、IL-10以及TNF-α表达水平分别为:14.88±0.80、12.49±0.28及0.89±0.39,正常育龄期妇女组IL-1、IL-10以及TNF-α表达水平分别为3.58±0.22、P25=0.90;P75=1.79及0.26±0.02。【结论】GDM患者外周血单个核细胞在体外经LPS刺激并培养下测定培养液中炎症因子大量表达。细胞中TLR4、Nf-κB mRNA大量表达,提示存在免疫炎症,推测LPS—TLR4—Nf-κB通路介导了大量炎症因子释放,体外模拟并验证了对于通路存在于GDM患者,并且介导了炎症因子的释放,导致体内致炎与抗炎的失衡,参与了GDM的发病,为从免疫炎症角度研究GDM的发病机制提供了新的理论支持。