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目的针对现有微球制备过程中溶剂效应对微球性能影响的研究存在不足,本研究以甘草次酸(GA)为模型药物,分别采用乳化-溶剂挥发法和新型凝胶模板技术在不同溶剂体系条件下制备载药微球,并系统比较所得微球的特征,以明确在载药微球成型过程中溶剂效应与微球结构和性能间的关联性。方法1.建立HPLC测定体外样品中GA含量的方法;摇瓶法测定GA在不同介质中的平衡溶解度(S);乌氏黏度计测定各溶剂体系及其PLGA溶液的流出时间(T0和T),并计算特性黏度(η);重量法测定并计算不同溶剂及其在水相中的挥发速率(V1和V2)。2.分别采用乳化-溶剂挥发法和凝胶模板法制备不同溶剂体系(单一溶剂、不同比例混合溶剂、等比例不同混合溶剂)条件下GA-PLGA微球,并考察溶剂对微球形态构造、载药及释药等特性的影响;测定微球粒径、载药量(D-L)、包封率(E-E)及体外释放度,显微镜下观察微球成型情况、扫描电子显微镜(SEM)观测微球表面及截面形态,并采用单液滴成型技术联合荧光示踪和共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)对微球成型的动态过程及药物分布情况进行观测、计算球体收缩率,并对CLSM图像进行处理获得药物分布相关参数;X射线粉末衍射(XRD)和差示扫描热分析(DSC)分析微球中药物的存在形式及药物和载体的相互作用。3.结合多种数据处理软件对上述结果进行分析和转化,提取载药微球相关的重要参数(粒径、E-E、球体收缩率、药物分布趋势、突释),并与溶剂特征参数(S、η、T0、T、V1或V2)进行相关性分析,拟合线性模型,描述溶剂效应与微球特性间的关联性。结果1.所得HPLC检测GA的方法分离度高、精密度好、专属性强;GA极微溶于水,但在有机溶剂中的溶解度较高;溶剂黏度与流出时间正相关,但PLGA特性黏度与溶剂黏度和聚合物溶解度均有关;不同体系混合V1与溶剂本身沸点有关,V2可能与溶剂在水中的溶解性有关。2.水包油(O/W)法制得的GA-PLGA微球均形态圆整,具良好的缓释效果。单一溶剂制得微球内部构造、D-L及E-E存在显著差异,其中乙酸乙酯(Et-Ac)制得微球的包封率最高(88.67±2.90%);不同比例二氯甲烷/二氧六环(DCM/DIO)混合溶剂微球的D-L及E-E相对单一DCM微球明显提高,但混合溶剂中DIO比例过高不利于微球载药性能的改善,其中DCM/DIO(2/1)微球包封率最高(85.07±1.42%),所得微球内部构造及粒径等的差异也导致其释药行为的不同;分别以DCM和Et-Ac为主溶剂制备亦可得到形态圆整的微球制剂;DCM体系微球内部药物大多以小球状形态分布,而Et-Ac体系微球内部均具较多孔洞结构,但后者制得微球粒径均较大、可有效改善微球的载药及释药行为。3.凝胶模板法制备微粒形态均一可控,但该方法下制得微粒突释较大,其载药性能随微粒制备时填充效果的改善明显提高。单一溶剂对微球表面形态几乎无影响,混合溶剂较单一溶剂具较好的填充效果,其中以丙酮(Ace)为主溶剂制备所得微球填充效果最佳,D-L和E-E最高,但所得微粒内部构造疏松,缓释性能不及以DCM为主溶剂制得微粒。4.相关性分析结果显示,与凝胶模板法相比O/W法制备所得微球受溶剂效应影响较显著。O/W法制备不同比例混合溶剂微球的粒径、E-E、突释、缓释均受溶剂效应的影响显著;等比例不同混合溶剂微球中以DCM为主溶剂制备载药微球时,溶剂仅对其突释及缓释性能具一定的影响;Et-Ac为主溶剂时T0、T、η、S等特性均与所得微球的粒径、载药及释药性能显著相关。凝胶模板法制备单一溶剂载药微粒时,其载药及释药性能仅受V1和V2调控;不同比例混合溶剂微粒E-E、突释及缓释行为除受V1和V2影响外,还受S及T0的影响;等比例不同混合溶剂微粒受溶剂效应影响最为显著,DCM为主溶剂时,溶剂效应主要对微粒释药性能进行调控,而以Ace为主溶剂制得微粒的载药及释药性能与溶剂参数间的相关性显著。经曲线估计,以上相关关系均符合一次或二次函数,结合函数性质计算可对溶剂效应与微球特性间的关联性进行量化。结论不同溶剂条件下采用乳化-溶剂挥发法和凝胶模板法均可制得形态完整的载药微球,但溶剂对所得微球的构造和性能影响显著,因此可通过选择适宜溶剂体系获取预定特征的载药微球。这对重新认识溶剂在微球成型过程中的地位具有重要价值,同时有利于提高微球制剂处方工艺优化效率。