【摘 要】
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目的:构建过氧化氢（hydrogen peroxide,H2O2）诱导体外人晶状体上皮细胞系SRA01/04的细胞氧化损伤模型,探讨并研究烟酰胺核糖（nicotinamide riboside,NR）对晶状体氧化损伤的抗氧化损伤作用及相关通路保护机制。方法:将人晶状体上皮细胞分为3组,分别为对照组、模型组（H2O2）及治疗组（NR+H2O2）。SRA01/04细胞经过药物处理后,MTT法和Hoec
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目的:构建过氧化氢（hydrogen peroxide,H2O2）诱导体外人晶状体上皮细胞系SRA01/04的细胞氧化损伤模型,探讨并研究烟酰胺核糖（nicotinamide riboside,NR）对晶状体氧化损伤的抗氧化损伤作用及相关通路保护机制。方法:将人晶状体上皮细胞分为3组,分别为对照组、模型组（H2O2）及治疗组（NR+H2O2）。SRA01/04细胞经过药物处理后,MTT法和Hoechst染色检测细胞增殖水平,Annexin V-FITC/PI染色结合流式细胞术检测细胞凋亡水平,DCFH-DA染色检测细胞内活性氧自由基（reactive oxygen species,ROS）水平,划痕实验检测细胞迁移能力,免疫印迹法（Western blot）检测细胞凋亡及相关通路蛋白水平,Mito-Tracker染色检测线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential,MMP）。结果:终浓度为600μmol/L的H2O2可诱导体外培养的人晶状体上皮细胞系SRA01/04细胞氧化损伤模型,且随着H2O2作用浓度和作用时间的增加,氧化损伤愈严重。终浓度为1mmol/L的烟酰胺核糖能够促进SRA01/04细胞的增殖,并减轻H2O2对SRA01/04细胞的增殖抑制程度。流式细胞术结果显示,对照组、模型组以及治疗组的细胞凋亡率分别为7.30%、44.05%、27.16%。DCFH-DA染料对细胞染色后,荧光显微镜下所见绿色荧光的荧光强度即反映了细胞内ROS的含量。对照组中无显著绿色荧光,模型组中可见细胞内绿色荧光强度显著增强,表明ROS含量显著提高,而治疗组中细胞的绿色荧光强度相对减弱,证明其ROS含量降低。划痕实验中,正常组细胞划痕后12小时的划痕愈合面积百分比为19.84±4.40%,加入烟酰胺核糖干预的细胞划痕后12小时的划痕愈合面积百分比为4.74±1.78%,两者差异具有统计学意义（P<0.0001）。Western blot结果证实模型组中细胞抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调,凋亡蛋白Caspase-3的酶原形式下调,而活化形式（Cleaved caspase-3）上调,治疗组中结果则相反,这与流式细胞术的结果相符。在MAPK通路中,烟酰胺核糖显著抑制H2O2诱导的p-ERK1/2蛋白表达（P<0.001）。与对照组和模型组相比,治疗组中p-JNK的表达增加,差异具有统计学意义（P<0.0001,P<0.0001）。在JAK2/Stat3通路中,与对照组相比,p-JAK2和p-Stat3在H2O2刺激下表达下调。然而,与模型组相比,治疗组中的p-JAK2和p-Stat3表达明显增加（P<0.001,P<0.0001）。对线粒体进行荧光染色,荧光显微镜下模型组线粒体红色荧光强度较正常组及治疗组低。相对荧光强度的统计学分析表明,与正常组相比,模型组MMP降低,二者差异具有统计学意义（P<0.05）,而治疗组MMP显著高于模型组（P<0.001）。结论:烟酰胺核糖可能通过MAPK通路和JAK2/Stat3通路改善H2O2诱导的SRA01/04细胞氧化损伤,抑制细胞凋亡和迁移,修复线粒体损伤,具有潜在的抗晶状体氧化损伤的作用。
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