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背景 随着现代辅助生育技术（Assisted reproductive technology，ART）的广泛开展，已经能用促排卵药物取得较高的排卵率，但着床率却一直徘徊在10％-15％的低水平。其中一个重要因素即子宫内膜容受性（uterine receptivity）降低，已成为影响ART成败的主要问题之一。在排卵周期中，子宫内膜仅在极短的时间内才允许胚泡植入，称为种植窗期（implantation window），通常在月经周期的20-24d，即LH高峰后的第7-11d。此时子宫内膜表现出最大的胚泡种植容受性。 多种调控分子参与了胚胎着床过程，如——白血病抑制因子（leukemia inhibitory factor，LIF），整合素家族（integrins），胞饮突，降钙素，血管表皮生长因子（VEGF）等。其中整合素β3和LIF在黄体中期以后（正常月经第19d以后）的子宫内膜中有高表达，其高表达时间与子宫内膜的种植窗期开放同步，而且整合素β3或LIF基因缺陷均会导致不孕。在子宫内膜种植窗期测定整合素β3和LIF的表达可以评估子宫内膜容受性，故均被视为子宫内膜容受性的标志物之一。 然而，大部分学者的研究表明，与自然排卵周期相比，在卵巢控制性超排卵周期（controlled ovarian hyperstimulation，COH）中，传统的促排卵方案，如克罗米酚（CC）／人绝经期促性腺激素（HMG）促排卵方案，损害了子宫内膜对胚胎的容受性。GnRH激动剂（GnRHa）是近年2004年浙江大学硕士学位论文集来广泛应用于临床的辅助促排卵药物，它通过改变天然GnRH十肚氨基酸的第六位和第十位氨基酸位点，使功能增强100倍以上。GnRHa能抑制内源性LH峰，避免过早黄素化，提高卵细胞质量，促使多个卵泡同步发育，增加取卵周期成功率。GnRHa长周期方案是目前中最常用的辅助超排卵方案，但一系列研究表明与自然排卵周期相比，使用GnRHa辅助超排卵并不能完全改善子宫内膜的容受性。GnRHa长周期方案还有诸如:Gn用量大，用药时间延长，OHSS发生率偏高，及由于“flare一up”引起的卵巢黄素化囊肿等副作用。GnRH拮抗剂（GnRHant）是GnRH类似物的一种，它通过对GnRH十肤结构的多个氨基酸位点作出结构改变，以非天然的氨基酸残基取代原有的天然氨基酸，直接参与竞争促性腺物质细胞膜上的受体，能即时抑制Gn分泌，抑制过早LH峰的出现，无月are一叩现象，且Gn用量少，用药时间短，OHSS发生率较GnRHa长周期方案明显降低。但临床前应用显示，GnRHant辅助超排卵与GnRHa辅助超排卵相比，临床妊娠率略偏低。因此，有学者对GnRHant在COH中对子宫内膜容受性是否造成负面影响产生争议，但无实验数据支持。 研究目的本实验以小鼠为研究对象，设计三种方案超排卵模型，通过比较小鼠种植窗期子宫内膜容受性标志物—白血病抑制因子和整合素日3 mRNA和蛋白的表达，探讨不同超排卵方案对子宫内膜容受性的影响，从而为临床超排卵方案的选择提供理论依据。 研究对象与方法模拟人类超排卵长周期方案，对小鼠进行不同方案超促排卵。根据超排卵方案的不同，按随机表顺序将40只小鼠分为4组，分别为促性腺激素释放激素激动剂（GnRHa）组，促性腺激素释放激素拮抗剂（GnRHant）组，孕马血清促性腺激素（P MSG）组及对照组，每组各10只小鼠。超排卵（对照组排卵）后48h，处死小鼠，取出子宫。SP免疫组织化学方法确定整合素p3和LIF在小鼠子宫内膜种植窗期的组织学定位。H一score组织学积分和westemblot方法分别对小鼠子宫内膜种植窗期整合素日3和LIF蛋白的表达进行半定量和相对定量分析。RT一PCR方法对小鼠子宫内膜整合素p3及LIF mRNA的表达进行相对定量分析。2004年浙江大学硕士学位论文集 结果1.小限的动情周期:小鼠的动情周期为4天，排卵一般发生在动情周期第一天晚上，排卵后典型的阴道涂片相出现在第二天早上，表现为大量的卵圆形上皮细胞。GnRHa和G nRHant连续使用8天后，典型的阴道涂片相消失。2.整合素p3和LIF在小鼠子宫内膜种植窗期的定位:经SP免疫组织化学法检测，在小鼠子宫内膜种植窗期，整合素甲和LIF的表达均定位子宫内膜腺上皮和腔上皮细胞的胞浆。3.整合素p3蛋白和 mRNA的表达:（l）小鼠种植窗期子宫内膜整合素p3蛋白表达半定量（sP免疫组化法）:与对照组相比，GnRHa组、GnRHant和PMSG组的表达显著降低，P分别为0.023，0.001和0.001;与PMSG组小鼠相比，GnRHa组的表达显著增高（尸=0.001），而GnRHant组的表达差异无显著性（作0.768）:与GnRHa组相比，GnRHant组的表达显著降低（P=0.o01）;（2）小鼠种植窗期子宫内膜整合素阳蛋白表达相对定量（W七stern Blot法）:与对照组相比，GnRHa组、GnRHant和PMSG组的表达显著降低，P分别为0.033，0.001和0.00一;与PMSG组相比，GnRHa组的表达显著增高（P=0.006），而GnRHant组的表达差异无显著性（尸=0.490）;与GnRHa组相比，GnRHant组的表达显著降低（尸二0.006）;（3）小鼠种植窗期子宫内膜整合素p 3mRNA表达（Rl，一PCR法）:与对照组相比，GnRHa组、GnRHant和PMSG组的表达显著降低，P分别为0.045，0.001和0.001;与PMSG组相比，GnRHa组的表达显著增高（尸=0.003）;而GnRHant组的表达无明显差异